论文部分内容阅读
目的：足细胞即肾小球脏层上皮细胞，是肾小球滤过屏障的重要组成部分。成熟足细胞是一种具有高度特异性且终级分化的细胞，不具有增殖特性，所以一旦丢失很难修复。大量研究表明足细胞损伤，脱落或凋亡是肾小球硬化起始和进展的主要原因。已有动物实验表明特异性环加氧酶2(COX-2)抑制剂对许多慢性肾脏疾病有减轻蛋白尿，延缓肾损害进展的作用，但作用机制尚未完全阐明。本研究旨在通过特异性COX-2抑制剂塞来昔布(Celecoxib)对嘌呤氨基核苷(PA)诱导的足细胞凋亡的影响，进一步探讨特异性COX-2抑制剂对足细胞保护作用的机制，为临床对慢性进行性肾损害的防治探索出新的治疗靶点。
方法：
1.将体外培养的条件永生性小鼠足细胞复苏并传代培养，采用Western blot法分析COX-2在足细胞中的表达。为进一步研究特异性COX-2抑制剂塞来昔布对嘌呤氨基核苷诱导的足细胞凋亡的影响建立实验基础。
2.以条件永生性小鼠足细胞株为研究对象，实验分为6组：正常对照组(CON)、嘌呤霉素氨基核苷组(PA)、地塞米松组(DEX)、塞来昔布组(CELE)、地塞米松+嘌呤氨基核苷组(DEX+PA)、塞来昔布+嘌呤氨基核苷组(CELE+PA)。分别在0、8、24和48h应用Hoechst33258荧光染色法观察足细胞的凋亡水平，并在上述时间点用Caspase-3活性检测试剂盒检测Caspase-3蛋白酶活性水平。在24h，用Western blot技术检测各组P53及COX-2水平。
结果：
1.在33℃增殖状态下，足细胞呈鹅卵石状，在37℃分化状态下的足细胞呈分叉状。正常足细胞在33℃表达COX-2，在37℃分化14d后，用低血清培养液培养后，随着时间延长，COX-2表达逐渐增多，24h达最高，以后再逐渐减少。
2.与正常对照组相比较，DEX、CELE组凋亡率无明显变化(P>0.05)，PA组凋亡率明显增高(P<0.001)，DEX+PA、CELE+PA组凋亡率较PA组明显下降(P<0.05)。
3.各组Caspase-3活性无明显差异(P>0.05)。
4.24h时，PA组P53表达较正常对照组明显增多，用DEX、CELE干预后其表达明显降低(P<0.05)。
5.正常对照组即可表达COX-2，用PA诱导24h，COX-2表达明显增加，用DEX、CELE干预后COX-2表达水平有所减少(P<0.05)。
结论：
1.COX-2在足细胞上的表达呈时间依赖性。
2.塞来昔布可以抑制PA诱导的足细胞凋亡，P53参与了PA诱导的足细胞凋亡过程。塞来昔布抑制PA诱导的足细胞凋亡可能与足细胞所表达的COX-2水平有一定的相关性。