【摘 要】
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研究目的本研究旨在探讨腺病毒载体(AdV)介导的人野生型p53、GM-CSF和B7-1基因对胶质瘤细胞的凋亡效应和免疫原性影响,以及动物在体实验中对胶质瘤的治疗效果,为进一步胶质瘤
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研究目的本研究旨在探讨腺病毒载体(AdV)介导的人野生型p53、GM-CSF和B7-1基因对胶质瘤细胞的凋亡效应和免疫原性影响,以及动物在体实验中对胶质瘤的治疗效果,为进一步胶质瘤的联合基因治疗提供实验依据。研究方法确定适宜的AdV感染倍数(MOI),选用胶质瘤细胞系U251和U87为模型细胞,以携带人WT-p53、GM-CSF、B7-1的AdV(BB-102)转染U251和U87细胞后,以Western印迹杂交法检测WT-p53基因的表达,ELISA法检测GM-CSF基因的表达,流式细胞仪检测B7-1基因的表达。台盼蓝染色法观察细胞存活,绘制生长曲线。PI-Hoechst33342染色法检测凋亡效应。MLR反应观察其对胶质瘤细胞免疫原性的影响。并观察BB-102介导的目的基因体外修饰胶质瘤细胞激活细胞毒性T淋巴细胞(CTL)反应。在体实验通过利用非肥胖糖尿病/严重联合免疫缺陷(NOD/SCID)小鼠重建人免疫系统和皮下移植人胶质瘤的模型,然后接种经BB-102基因修饰的胶质瘤瘤苗,激发淋巴细胞产生抗肿瘤免疫反应,从而对瘤苗的免疫保护作用进行评价。结果AdV能够有效转染胶质瘤细胞,转染效率与MOI在一定范围内呈正相关,适宜的MOI为200 pfu/cell。重组腺病毒BB-102能够有效地将其所携带的三种目的基因导入胶质瘤细胞并使其在细胞中高效表达,同时能抑制细胞增殖,诱导胶质瘤细胞凋亡,增强其免疫原性并可以激活淋巴细胞的CTL反应。应用HuPBL-NOD/SCID小鼠模型进行免疫保护实验,结果证明BB-102基因修饰的胶质瘤瘤苗可以明显抑制移植瘤生长,能够保护HuPBL-NOD/SCID小鼠抵抗胶质瘤细胞的攻击。结论重组腺病毒介导的人WT-p53、GM-CSF和B7-1基因体外修饰胶质瘤细胞可作为胶质瘤细胞瘤苗,有望应用于临床胶质瘤的辅助治疗。
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