目的胶质瘤是人类最常见的神经系统恶性肿瘤之一。其中胶质母细胞瘤(Ⅳ级)被认为是最具恶性的病理学形式。目前针对胶质瘤的治疗主要采用手术为主并辅以放化疗的综合疗法。然而由于胶质瘤的侵袭性及其对放疗和化疗的抵抗,使其容易复发,大大降低了治疗的效果。随着肿瘤基因组学以及分子生物学研究的进步,越来越多的研究证实了胶质瘤发生发展过程中相关的分子生物学机制,因此探寻有效的可行性高的的治疗靶点对攻克胶质瘤这一世界性难题具有重大的临床意义。长链非编码RNA Meg3与肿瘤的关系已被广泛的研究。有报道指出Meg3参与了肝癌和肺癌细胞EMT过程。然而Meg3与神经胶质瘤细胞EMT和侵袭的关系尚未被充分的研究。在本研究中我们采用重组质粒转染技术,过表达胶质瘤细胞内Meg3基因后,阐述Meg3对人脑胶质瘤细胞EMT和侵袭的影响及其作用的机制,以期为治疗胶质瘤提供新的思路。方法(1)利用Real-time PCR方法检测从患者肿瘤组织中分离的原代细胞和人脑胶质瘤细胞系中Meg3基因的表达丰度。(2)构建Meg3过表达细胞模型,培养Meg3过表达的胶质瘤细胞,在显微镜下观察其形态变化。采用Realtime PCR、Western blot法检测Meg3过表达后胶质瘤细胞EMT相关基因的表达水平。利用Transwell迁移和侵袭实验检测Meg3过表达对胶质瘤细胞迁移和侵袭能力的影响。(3)采用吖啶橙染色法和免疫荧光法检测Meg3过表达对胶质瘤细胞自噬的影响。利用Real-time PCR、Western blot法检测Meg3过表达后胶质瘤细胞自噬相关基因的表达水平。(4)利用Western blot法检测自噬抑制剂对胶质瘤细胞作用的有效性及其对胶质瘤细胞EMT的影响,用显微镜观察自噬抑制剂对胶质瘤细胞形态的影响,利用Real-time PCR检测自噬抑制剂对胶质瘤细胞Meg3基因表达的影响。(5)采用Western blot法及Transwell迁移和侵袭实验检测Meg3过表达对胶质瘤细胞EMT、迁移和侵袭的作用是否受自噬抑制剂的影响。结果(1)与肿瘤组织中分离的原代细胞和A172人脑胶质瘤细胞系相比,Meg3基因在U87和U251胶质瘤细胞系中表达丰度较低。(2)过表达U87和U251人脑胶质瘤细胞系的Meg3基因能够诱导人脑胶质瘤细胞的EMT、迁移、侵袭及自噬。(3)自噬抑制剂能有效抑制U87和U251胶质瘤细胞的EMT而不影响Meg3基因的表达。(4)在神经胶质瘤细胞中,Meg3诱导的EMT,迁移和侵袭可以被自噬抑制剂CQ(100μM)和Lys05(10μM)部分逆转。结论所有的实验数据表明了Meg3通过自噬诱导胶质瘤细胞的EMT和侵袭。总体而言,本研究的发现证明了Meg3在神经胶质瘤分子病因学中的重要性,同时也表明了其在神经胶质瘤治疗中的潜在应用。