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核酸是生物遗传信息载体,其完整性对生物生存和正常繁衍至关重要。单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphism,SNP)和基因损伤的分析检测在当前生化研究和临床诊断等领域具有重要的意义,开发简便、快速、高灵敏和特异性好的核酸检测新方法具有广泛的应用前景。论文主要应用环介导等温扩增(Loop-Mediated Isothermal Amplification,LAMP)、毛细管电泳(Capillary Electrophoresis,CE)、荧光共振能量转移(Fluorescence Resonance Energy Transfer,FRET)等技术,研究开发了高灵敏度检测DNA SNP和氧化损伤水平的新方法,并在耐力水平评价、运动遗传病预防等多个体育科研领域中的应用进行了研究,主要内容如下:1、基于连接酶LAMP技术建立了检测运动员耐力杰出型基因ACTN3 SNP的新方法。方法设计了与目标DNA序列互补的茎环结构探针,利用探针连接反应引发LAMP反应,采用SBYR Green I染料对双链DNA进行实时荧光定量检测,根据POI值(实时荧光曲线中的最大斜率对应的时间)差异实现ACTN3基因SNP的高灵敏度分型。此方法对DNA定量检出限为100 aM,可测定0.1%突变频率,同时应用于人全血基因组DNA样品检测获得了与DNA测序一致的结果。2、基于上述连接酶LAMP原理,采用CE实现在单个反应体系中同时检测多个耐力基因的SNP位点。在反应过程中,在一条引物上标记荧光基团;针对不同SNP位点,设计具有不同长度的连接探针,连接反应准确区分碱基错配,LAMP反应后产物进行酶切,荧光产物通过SeqStudioTM基因分析仪的CE分离和激光诱导荧光检测,进行片段分析,根据不同长度的荧光产物来进行4种SNP类型的区分,方法对DNA检出限低至2 aM。3、基于阳离子共轭聚合物PFP FRET原理建立了一种检测DNA氧化损伤水平的新方法。该方法通过DNA修复酶处理氧化损伤DNA样品获得3’-5’磷酸核苷酸间隙,用DNA聚合酶标记荧光,再加入PFP获得PFP-DNA复合物,通过FRET检测DNA的氧化损伤水平。实验结果表明,该方法具有较高的灵敏度和特异性,人基因组DNA的检出限为1ng/μL。与现有方法相比,该方法解决了DNA损伤检测步骤繁琐、灵敏度低、选择性低的缺点,在临床医学检测中具有良好的应用前景。