阪崎克罗诺杆菌(Cronobater sakazakii)是一种条件致病菌,能在人和动物的肠道内寄生的一种无芽孢的革兰氏阴性杆菌。这一致病菌能导致各个年龄段的人感染,对新生儿的威胁较大,能引起新生儿脑膜炎,菌血症和坏死性小肠结肠炎,死亡率达40%-80%。此外,还能引起成人的局部感染、骨髓炎和菌血症等。目前的研究显示阪崎克罗诺杆菌的毒力具有多样性,乳鼠灌胃实验表明不同阪崎克罗诺杆菌菌株之间的毒力存在明显差异。虽然阪崎克罗诺杆菌已经成为国内外研究的焦点,但是其致病机制仍然不够清楚。为了获得阪崎克罗诺杆菌的毒力相关基因,本研究利用腹腔注射ICR小鼠对24株食源性分离株的毒力进行了检测,根据致死时间判断不同菌株的毒力大小。从中选择毒力最高和毒力最低的菌株,利用抑制性杂交(SSH)筛选其差异基因,结果共获得7个差异片段,测序后将结果输入NCBI数据库进行BlastN与BlastX比对分析,确定基因性质。其中基因pap(编码菌毛亚基转运与菌毛组装相关蛋白,可能与阪崎克罗诺杆菌的致病性有关为了进一步确认pap(基因的毒力相关性,利用基因敲除同源重组技术构建了pap(基因缺失突变株ΔpapC,通过PCR技术对缺失突变株进行了确认。将108CFU野生株与突变株ΔpapC分别腹腔注射出生三天的SD乳鼠,记录乳鼠死亡时间,结果显示野生株的平均致死时间为6.5小时,而突变株的平均致死时间为9.625小时,ΔpapC突变株毒力明显降低。将野生株与缺失突变株作梯度稀释,分别腹腔注射SD乳鼠,记录不同注射剂量实验组动物的死亡情况,计算半致死剂量(LD50),结果显示野生株的LDso为3.162×106CFU,突变株的LD50为8.511×106CFU,突变株的半致死剂量提高了2.69倍。以上动物实验证实了papC基因与菌株的毒性相关。本研究为阪崎克罗诺杆菌致病机制的研究奠定了基础。