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目的：培养小鼠骨髓树突状细胞(dendriticcells，DC)，构建有白细胞介素12(IL-12)siRNA基因的，能在树突状细胞(DC)表达的重组腺病毒载体，探讨IL-12siRNA(IL-12p35siRNA，IL-12p40siRNA)重组腺病毒载体感染树突状细胞后对其功能的影响及其在诱导同种小鼠心脏移植耐受中的作用。
方法：无菌制备C57BL/6小鼠骨髓，依次用红细胞裂解液去除红细胞，通过半粘附法去除T、B细胞，又在粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素-4(IL-4)协同诱导下培育,DC前体分化发育成DC并扩增。在第7天用脂多糖(LPS)刺激24h，检测细胞因子IL-12浓度及细胞表面标志CD11c、CD80、CD86和MHCⅡ。构建携带有IL-12p35siRNAcDNA，IL-12p40siRNAcDNA，HKcDNA(阴性对照)重组腺病毒质粒(Ad-IL-12p35siRNA,Ad-IL-12p40siRNA,Ad-HKsiRNA)，同时感染DC。检测DC表面标志物CD11c、CD80、CD86和MHCⅡ类分子的表达，观察IL-12p35亚基mRNA、IL-12p40亚基mRNA和IL-10mRNA的表达，检测上清中IL-12p70和IL-10水平。重组腺病毒感染后DC与同种小鼠T细胞行混合淋巴细胞培养，同时测定上清中IL-4和IFN-γ浓度。同种小鼠异位心脏移植前7d经尾静脉注射Ad-IL-12p35siRNA，Ad-HKsiRNA处理的供者DC,观察移植心脏存活时间以及受鼠血清中TH1和TH2细胞因子的变化。
结果：DC细胞数增加，其形态在光镜下多为特征性星形，也有梭形和多角形；至培养第9天DC细胞表面标志CD11c、CD80、CD86和MHCⅡ阳性率分别为74.90±14.36％、60.09±10.54％、57.77±11.78％和55.78±14.24％，IL-12浓度较未用LPS组明显增加(P＜0.01)。重组腺病毒载体经形态学、病毒DNA酶切、聚合酶链反应(PCR)和逆转录(RT)等方法的鉴定，证实了载体构建的正确性，经测定病毒滴度为2.0×109pfu/ml。IL-12p35siRNA、IL-12p40siRNA重组腺病毒载体分别感染树突状细胞后，干扰了IL-12p35亚基mRNA和IL-12p40亚基mRNA的表达，但是只有IL-12p35siRNA重组腺病毒载体感染DC上清中IL-12p70明显减少，其表面标志物(CD11c、CD80、CD86和MHCⅡ类分子)明显减少，同时引起了IL-10mRNA的表达和IL-10水平的升高，在混合淋巴细胞培养中引起的淋巴细胞增值能力最低，并导致混合培养上清中IL-4的上升和IFN-γ的下降。接受Ad-IL-12p35siRNA感染DC回输的受者移植心脏存活期较阴性对照组、未转染组显著延长，并且显著抑制了TH1细胞因子的产生。
结论：从骨髓中培养所得细胞的形态和功能符合DC，用LPS刺激可以获得成熟DC。成功构建带有IL-12p35siRNAcDNA，IL-12p40siRNAcDNA的重组腺病毒载体，所携带的IL-12p35siRNA，IL-12p40siRNA载体能够转染小鼠DC并干扰其在DC中表达。IL-12p35亚基特异性siRNA能够成功阻止IL-12mRNA的表达，降低了具有生物活性IL-12p70的浓度，提高IL-10的浓度，抑制CD11c、CD80、CD86和MHCⅡ类分子的表达，从而抑制DC的共刺激活动，导致在体外TH2偏移。Ad-IL-12p35siRNA处理的DC能够诱导针对移植供者的特异性免疫耐受。