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目的：囊泡ATP水解酶（Vacuolar ATPase，V-ATPase）是一类位于细胞器（如溶酶体、高尔基体）表面以及细胞膜表面的质子泵，其主要功能是维持细胞器或胞内的pH。然而近年来大量研究发现V-ATPase还有许多其他功能，如感应氨基酸使mTORC1激活、参与膜融合、调节肌动蛋白聚合等。尽管V-ATPase在活化mTORC1的过程中不可或缺，但其具体的调控机制仍不清楚。前期结果发现，在V-ATPase众多亚基中，大部分亚单位广泛表达，唯独ATP6V0d2在巨噬细胞中特异性高表达。因此本文旨在探究骨髓来源巨噬细胞中ATP6V0d2介导氨基酸激活mTORC1的具体分子机制和ATP6V0d2对巨噬细胞极化的影响。 方法：1）分离纯化小鼠骨髓来源巨噬细胞，Western Blot检测不同氨基酸（亮氨酸、谷氨酰胺、精氨酸）刺激下野生型小鼠巨噬细胞与HEK293T细胞中mTORC1下游底物pS6和p4EBP1的活化情况。2）亮氨酸刺激野生型和Atp6v0d2基因敲除BMDMs，提取蛋白后Western Blot检测pS6和p4EBP1水平；亮氨酸刺激野生型和Atp6v0d2基因敲除BMDMs后进行免疫荧光实验，检测mTOR和LAMP1是否共定位；通过转染空白载体与HA-ATP6V0d2质粒至HEK293T细胞内，提取蛋白后通过Western Blot检测pS6和p4EBP1的水平。3）RT-PCR检测对比野生型与Atp6v0d2基因敲除BMDMs中V-ATPase亚基Atp6v0a1、Atp6v0c、Atp6v0d1等基因mRNA表达水平；提取野生型和Atp6v0d2敲除BMDMs的膜蛋白与胞浆蛋白，Western Blot检测V-ATPase组装情况。4）免疫共沉淀实验检测在巨噬细胞、HEK293T细胞中p14、p18是否与ATP6V0d2相互作用。5）分离纯化小鼠骨髓来源巨噬细胞，分别用LPS、IFN-?和IL-4刺激巨噬细胞48h后收集RNA，RT-PCR检测野生型与Atp6v0d2基因敲除巨噬细胞M1型表面标记基因iNOS、IL-6和M2型表面标记基因如Arg-1、Fizz1的表达；流式细胞术检测野生型与Atp6v0d2基因敲除巨噬细胞M1型和M2型表面标记的表达差异。 结果：1.不同于HEK293T细胞和小鼠胚胎成纤维细胞，巨噬细胞中谷氨酰胺及精氨酸均不能激活mTORC1，只有亮氨酸能够使mTORC1活化。 2.敲除小鼠Atp6v0d2基因后，pS6和p4EBP1水平降低；在HEK293T细胞过表达ATP6V0d2后，mTORC1活化增强。 3.在巨噬细胞中，ATP6V0d2并不与p14或p18相互作用。 4.Atp6v0d2敲除巨噬细胞向M2型极化增强。 结论：ATP6V0d2介导巨噬细胞中亮氨酸活化mTORC1，且不通过与Ragulator的两个亚基相互作用。ATP6V0d2影响巨噬细胞的极化，敲除该亚基后巨噬细胞向M2型极化增强。