AAA-ATPase基因家族是一个庞大的、功能多样化的基因家族,它们的编码蛋白属于环状P-loop型NTP酶的AAA~+蛋白超家族。AAA-ATPase基因家族广泛存在于所有的生物体中,与多种细胞的生理活性相关,包括DNA复制、蛋白质降解、膜融合、微管断裂、过氧化物酶体生物合成、信号转导和基因表达调控等过程。近年来,关于AAA-ATPase基因家族在植物抗病反应中的研究越来越深入。OsAAA1是一个新的AAA-ATPase家族基因成员,由本实验室通过基因芯片技术筛选所得。OsAAA1参与稻瘟病抗性反应,受到稻瘟病菌和水杨酸诱导时表达量显著上调。本研究对OsAAA1的RNAi植株及其PR1b诱导型启动子转基因植株进行了分子鉴定与抗性分析。同时使用酵母双杂交技术筛选了OsAAA1的互作蛋白,并期望通过BiFC技术对筛选出的蛋白进行验证。本研究为深入研究OsAAA1基因的抗病功能和分子机理奠定了基础,主要内容如下:(1)对OsAAA1的PR1b诱导型启动子植株进行了分子鉴定,并对阳性植株进行了稻瘟病菌诱导表达分析。结果表明,诱导型启动子PR1b成功受到稻瘟病菌的诱导,启动了OsAAA1基因的表达,接种后OsAAA1的表达水平显著上调。对其进行抗性分析表明,OsAAA1诱导表达后植株对稻瘟病菌的抗性显著提高,病斑的大小和叶片的稻瘟病菌含量均低于对照组。(2)对OsAAA1的RNAi植株进行了分子和表达量的鉴定,并对OsAAA1表达量显著下调的株系进行了稻瘟病菌的接种实验。结果表明,OsAAA1被干涉后植株的感病情况明显变严重,叶片甚至出现了急性萎焉。对叶片中稻瘟病菌的含量检测显示,RNAi植株明显高于对照组植株。(3)利用酵母双杂交技术初步筛选到OsAAA1的5个互作蛋白:WRKY19、WRKY66、WRKY68、Pib和Pit,并对其中的WRKY68和Pit以及OsAAA1的N端和C端进行了BiFC载体的构建。通过注射本氏烟草观察荧光,初步确定了OsAAA1N和WRKY68之间存在相互作用。同时,成功构建了OsAAA1的核文库筛选诱饵载体,为进一步筛选其互作蛋白奠定了基础。