前言 肿瘤在人体内的发生及发展中，随着时间的延长，肿瘤细胞可能会获得越来越多的遗传学改变。研究发现，很多肿瘤有染色体10q23的杂合性丢失。1997年，美国3个实验室先后在该位点发现了一个肿瘤抑制基因，分别命名为：PTEN(Phosphatase and Tensin Homology Deleted On Chromosome)，MMAC1(Mutated in Multiple Advanced Cancer)，TEP1(TCF_β Regulated And Epithelial Cell-enriched Phosphatase)。实际上，这3个基因是同一个基因，在本文中，该基因被统称为PTEN。 PTEN是定位于10q23.3上的抑癌基因，PTEN的蛋白产物与细胞张力蛋白和辅助蛋白及双特异性磷酸酶有同源性。PTEN重组产物表现为抗磷酸酪氨酸和磷酸苏氨酸的活性。PTEN的过表达既抑制某些细胞系中肿瘤克隆的形成，也能抑制裸鼠的肿瘤克隆细胞形成。通过PTEN直接使FAK去磷酸化，从而抑制细胞的浸润和转移。PTEN同时还具有磷酸酯酶特异性，能使PI3k的直接产物——3，4，5-三磷酸磷脂酰肌醇和3，4-三磷酸磷脂酰肌醇——去磷酸化。 骨肉瘤是人类最常见的原发恶性骨肿瘤，常危及成人及青少年。对于接受根治术患者而言，病理阶段和分期是重要的预后指标。但骨肉瘤也有很多的不一致性，使在做根治术时难于鉴别有恶性预后的肿瘤。至今骨肉瘤的分子致瘤机制仍知之甚少，虽然报道发现PTEN表达的缺失常见于异种移植的细胞系中，并可通过增强甲基化和翻译修饰而非通过基因缺失和突变就可以使PTEN失活。但是，目前还未有关于骨肉瘤PTEN甲基化的研究报道。免疫组化是进一步深人研究的基础，本研究用兔疫组化方法检测骨肉瘤中NliN蛋白的缺失程度。用鼠单克隆抗Wit：N抗体分析43例石蜡包埋的骨肉瘤及已知骨肉瘤肿瘤分期中FI’T’N蛋白表达的情况。 材料与方法 二．材料 25例骨肉瘤和30例骨软骨瘤蜡块为中国医科大学第一临床．学院病理科存档手术标本，18例骨肉瘤为沈阳军区总医院病理科提供，根据 WHO骨肉瘤分类标准，分为高分化骨肉瘤（I－11级）23例和低分化（皿级）骨肉瘤20例。骨肉瘤发病年龄13－42岁，其中男23例，女20例。并选取同期30例骨良性病变（骨软骨瘤）手术标本作为正常对照组。标本均经4％甲醛固定、石蜡包埋／－6 pm厚切片。 2．实验方法 采用免疫组织化学法检测PfEN蛋白的表达情况，抗PFIii：N系SantaCruz公司鼠单克隆抗体KC7974＊，S－P及DAB试剂盒亦购自SantaCruz公司。切片脱蜡后，按S－P免疫组化试剂盒步骤进行。抗PITIIN稀释度为几50。阴性对照用PBS代替抗eTliN抗体，阳性表达以胞质内出现明显的棕色颗粒为判断标准，每例随机计数1000个瘤细胞中呈阳性表达的瘤细胞，并计算其阳性表达的百分率。O）阴性（－厂无阳性瘤细胞或阳性瘤细胞数＜10％；p）阳性（＋入阳性瘤细胞占10％－叩兜；门）阳性（计X＞40％。统计分析采用SPSS10．0统计软件包，进行X‘检验。 ·2· 结 果 互．免疫组织化学结果：PIT：Ii：N蛋白阳性反应均定位于胞浆，呈棕色或棕黄色颗粒。在骨良性病变与骨肉瘤中Iyv’＝’N蛋白的表达分别为：30例骨良性病变阳性表达率为83．3％，43例骨肉瘤阳性表达率为sl．2％，经Pearson卡方检验，两者差异在统计学上有到常显著性意义（X’＝7．976，P＜0．01）。 2．骨肉瘤不同组织分化程度中Pill：N蛋白的表达分别为：了－H级，蛋白阳性表达率为73．9％门7人3）；皿级，蛋白阳性表达率为 25．0％O／20X两组之间在统计学上有显著性差异帅＜0．of）。 讨 论 本研究结果显示，PITh：N蛋白的表达率骨软骨瘤明显高于骨肉瘤，两者之间有显著差异汀＜0o门，提示FI’E N作为肿瘤抑制基因其功能的失活与恶性肿瘤的发生有一定的关系。而且，PI’’－－N蛋白表达与骨肉瘤的组织学分化程度铡相关，即组织学分化程度高，恶性程度低，PYIIN蛋白表达率高；不表达或表达弱者多见于组织学分化程度低，恶性程度高的骨肉瘤，也说明该基因的失活随着肿瘤分化程度的降低而逐步递增。由于检测的病例数不多，难于解释恶性程度较低的骨肉瘤（I－11）中存在PI’’’’N蛋白表达呈阴性的结果，是否提示有进一步恶性转变的可能？从以往报道的有关PfEN的文献来看，其基因的杂合子丢失相对常见，然而开放阅读框内的突变率并非很高。本研究结果显示骨肉瘤中PFIIN基因蛋白失活率接近 75％，提示可能存在多种可能性，ja DNA甲基化启动子区域的突变以及该基因的表达受其它基因的调控等。 ·3·随着研究的深人，PlliN基因失活的机理将会逐渐明了。总之，利用兔疫组化方法检测肿瘤PliN基因功能失活所致蛋白缺失这一途径，对于逐渐弄清p’t－－N蛋白表达与病人预后的关系，明确该基因的临床意义，将是有帮助的。 在本组资料中，发现PTEN表达缺失与骨肉瘤的病理分级有相关性?