多粘类芽孢杆菌是一种植物根际促生菌,具有固氮、解磷、产生抗生素、分泌植物激素、几丁质酶和水解酶,可以提高土壤肥力等特点,同时研究发现多粘类芽孢杆菌,对人和动物没有致病性,某些菌株具有抗菌活性。本实验室筛选的多粘类芽孢杆菌应用于微生物有机肥的研制,取得了良好的应用效果。为进一步研究多粘类芽孢杆菌微生物有机肥的作用机理,本研究建立了荧光原位杂交(FISH)检测多粘类芽孢杆菌菌体和芽孢的方法,并对此方法的操作步骤和实验条件进行优化,旨在为有机肥和环境条件中的多粘类芽孢杆菌的检测技术提供理论基础。本文研究结果如下：1. FISH检测多粘类芽孢杆菌菌体的最优化实验条件为：样品收集时进行1×PBS冲洗2-3次；无水乙醇4℃固定2h；0.01%SDS处理分散菌体；杂交温度为48℃,时间为2h,甲酰胺浓度为35%,清洗液中NaCl浓度为60 mM。2. FISH检测多粘类芽孢杆菌芽孢的预处理方法有化学预处理和萌发预处理,10M HCl 37℃处理30 min,0.1 M NaOH0℃处理30 min,10 mg/mL SDS+50 mM DTT 60℃处理15 min和1 mg/mL溶菌酶37℃处理15 min为化学预处理,杂交效率分别为75.2%,86.6%和64.7%,扫描电镜显示,化学预处理芽孢表面结构松散,少数裂解。L-丙氨酸+腺苷+水解酪蛋白37℃处理5 min为萌发预处理,杂交效率为92.3%,扫描电镜显示,萌发预处理芽孢膨胀,表面结构光滑,形态完整。3.利用萌发预处理FISH和平板计数同时对接种在猪粪有机肥中的多粘类芽孢杆菌SQR21进行检测,结果发现FISH方法与平板方法计数芽孢数和总数,均有一个数量级的差别,而且FISH能更准确地反映芽孢变化的过程。4.FISH检测添加多粘类芽孢杆菌的猪粪有机肥在发酵过程中的菌体生长变化,结果发现第2天和第3天细胞均有显著增长现象,且大多数为营养体细胞；发酵第5天细胞无增长现象,芽孢开始出现；发酵第10天细胞总量显著减少,大部分细胞以芽孢形式存在；发酵第20天细胞总量无明显变化,芽孢占绝对优势。