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猪嗜血支原体(Mycoplasma suis,M.suis)是一种无细胞壁、革兰氏阴性、嗜血感染的病原体。被感染的猪临床表现为贫血、发热、黄疸，繁殖性能下降，且感染常引起猪群的免疫抑制，造成共感染和继发感染。该病呈世界性分布，严重危害了养猪业的发展，给养猪业造成了较大的经济损失。由于在诊断技术方面的研究十分缺乏，目前仍无有效的试剂盒可供使用。因此，迫切地需要开发可以适用于该病临床诊断的试剂盒。文献报道，MSG1蛋白是猪嗜血支原体的一种关键的黏附蛋白，因其具备良好的免疫原性，为ELISA的建立提供了条件。参照实验室已建立的猪嗜血支原体阻断ELISA方法，组装试剂盒，且对该试剂盒进行保存期实验。 汉塞巴尔通体(Bartonella henselae，B.henselae)属于巴尔通体家族，是猫爪病的病原体。该病为世界性分布的人兽共患传染病，其主要的临床症状表现为淋巴结肿大，杆菌性血管瘤病、骨髓炎、心内膜炎、肝紫癜。17-kDa蛋白是B.henselae中少数具有良好免疫原性的蛋白，为ELISA的建立提供了条件。尽管在世界范围内对人和多种哺乳动物已经进行了大量关于汉赛巴尔通体的研究，但目前仍没有关于猪群中汉赛巴尔通体流行病学的研究。本研究以17-kDa为包被抗原建立ELISA检测方法对猪群的汉赛巴尔通体感染情况进行调查。本研究详细内容如下: 1.猪嗜血支原体血清阻断ELISA试剂盒的制备与保存期实验 参照实验室已建立的猪嗜血支原体阻断ELISA方法，来开发试剂盒。分别制备了试剂盒所需的组成成份，同时对各成份进行了质量鉴定。结果表明，获得的重组MSG1经纯化后，没有明显杂带，且在45kDa处有显著条带，经Western blot显示出良好的抗原性。另外抗原包被板、阴阳性对照血清、1A7-HRP酶标抗体、稀释液、洗涤液、显色液、终止液经鉴定质量稳定，可以用于试剂盒的开发。在保存实验中，用保护剂分别处理试剂盒中的关键成份，随后进行37℃加速实验4℃长期保存实验。结果表明，在37℃加速破坏实验中试剂盒各组分性状和质量表现稳定，4℃长期保存实验中，试剂盒在11个月内表现稳定。进一步为试剂盒的最终开发提供了数据支撑。 2.中国东部地区猪嗜血支原体血清流行病学调查 本研究利用阻断ELISA方法检测了随机从中国东部7个省（市）采集的3458份具有临床背景的猪血清，结果表明猪嗜血支原体总血清阳性率为33.26％，2014年为25.91％，2015年为37.81％，2016年为37.77％。其中上海的血清阳性率最高(54.15％)，江苏地区的最低(23.02％);其他地区:浙江，江西，安徽，福建和山东的血清阳性率则分别为33.82％，40.1％，28.02％，33.62％和32.86％。在种群水平层次上，母猪，公猪和后备母猪的血清阳性率分别为46.97％，47.11％和39.19％，明显高于保育猪12.5％，仔猪24.16％和育肥猪17.16％。而且血清阳性率在夏季和秋季要明显高于春季和冬季。流行病学调查数据表明猪嗜血支原体的感染率在逐年显著增加，应当引起重视。 3.中国东部地区猪群中汉赛巴尔通体血清流行病学调查 本研究采用间接ELISA方法检测了随机从中国东部7个省（市）采集的4298份具有临床背景的猪血清，结果表明总血清率为43.09％，在2014年，2015年和2016年的血清阳性率分别为40.8％，43.6％和44.8％。且夏季和秋季的血清阳性率要显著地高于春季和冬季。其中福建的血清阳性率最高为46.90％，江西地区的最低(34.29％);其他地区:江苏46.79％，浙江42.96％，安徽42.23％，上海45.30％，山东43.15％。另外在种群水平上，母猪，公猪和后备母猪血清阳性率分别57.90％，52.45％和47.98％要明显高于保育猪(23.20％)，仔猪(35.65％)和育肥猪(36.41％)。这些数据表明汉赛巴尔通体在猪群中的感染已经存在了很长时间而且呈增长态势。因此，从公共卫生安全考虑，应该对猪群中的汉赛巴尔通体感染率进行密切监视。