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本文以生物印迹技术(Bio-imprinting)为核心,以1-苯乙醇手性拆分反应为模型体系,制备高效生物印迹脂肪酶PPL,同时针对生物印迹酶在有机溶剂中分散度低,传质限制严重的缺陷,提出生物印迹酶纳米微囊和生物印迹酶单酶纳米凝胶制备新工艺,并将其应用于重要的光学活性药物前体1-苯乙醇的手性拆分中。主要结论如下:生物印迹脂肪酶PPL:利用生物印迹方法制得对1-苯乙醇具有手性拆分功能的生物印迹脂肪酶PPL,相比天然酶的活性和选择性有大幅提高。研究发现,S-(+)-扁桃酸乙酯和R-(+)-苯乙醇相结合是理想的印迹模板,最佳印迹pH为7.2,所得印迹酶转酯活性Ea=644.8U,E>2000;印迹酶表面呈多孔道分布,增大了酶与底物的接触表面积;印迹过程使得脂肪酶二级结构发生明显改变,其中α-螺旋的含量高于冻干后的天然酶,而β-折叠含量较天然酶降低。生物印迹脂肪酶PPL在1-苯乙醇拆分中的应用:优化得到1-苯乙醇拆分反应最佳条件:反应溶剂为异丙醚,催化温度35oC,反应底物摩尔比为1:3(1-苯乙醇:乙酸乙烯酯),酶浓度为62.5mg/ml,反应10h,转化率可达43.2%,接近拆分极限,E>2000,且具有较高的重复利用性和稳定性。生物印迹酶纳米微囊:为了提高生物印迹酶在有机体系中的分散度,提出利用壳聚糖-三聚磷酸钠(TPP)包埋制备生物印迹酶纳米微囊新工艺,最佳制备条件为:壳聚糖浓度为0.75%,壳聚糖与TPP的质量浓度比为1:1,体积比为1:1.5,最佳交联时间为10min,交联温度为15oC;所制得的纳米微囊呈大小均一,分散均匀的球状结构,直径约为50nm,在有机体系中分散度好;印迹酶在制为纳米微囊后,在等量蛋白浓度下,活性进一步提高。生物印迹酶单酶纳米凝胶:利用聚合物材料包埋制备单酶纳米凝胶,其制备工艺为:N-丙烯酰氧基琥珀酰亚胺浓度为7.5mg/ml,最佳pH为8;单酶纳米凝胶外形规则,粒径约为30~40nm,分布均匀,在有机体系中分散度好。然而,印迹酶在制为单酶纳米凝胶后,活性并未提高,略有降低,工艺尚待改进。