亚洲镰孢菌(Fusarium asiaticum)对氰烯菌酯的抗药性遗传多样性及其适合度研究

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亚洲镰孢菌(Fiusarium asiaticum)是我国小麦赤霉病发生最为严重的江淮流域和西南麦区的主要病原菌。氰烯菌酯是目前替代多菌灵防治小麦赤霉病最有效的新型杀菌剂之一。实验室前期研究表明,赤霉病菌肌球蛋白5发生点突变可产生对氰烯菌酯的抗药性。本文研究氰烯菌酯抗性基因型及突变频率,以及肌球蛋白5点突变对病原菌适合度关键性状的影响,对于评估氰烯菌酯抗性风险、研发抗药性分子检测技术和制定抗性治理策略具有重要意义。将亚洲镰孢菌野生型敏感菌株2021在含氰烯菌酯亚致死浓度培养基上驯化培养14天,从接种的1000个菌落上得到239个抗药性突变体,突变频率为23.9%。突变体的氰烯菌酯抗性性状能够在无药剂选择压下继代遗传。根据突变体抗药性水平的分布特征,可以将对氰烯菌酯的抗药性分为低抗、中抗和高抗三种类型。在239个突变体中,表现为低抗、中抗和高抗的比例分别为27.2%,5.0%和67.8%,高、低抗变异频率各占1/3和1/4以上。亚洲镰孢菌在离体条件下对氰烯菌酯产生较高频率的高水平抗性变异,揭示了生产上存在该杀菌剂快速产生抗药性的风险。随机测定82个氰烯菌酯抗性突变体肌球蛋白5的基因序列,与出发敏感菌株2021相比,各突变体在肌球蛋白5碱基序列的不同位置上发生了变异。其中表现为低抗的突变基因型有 A135T、V151M、P204S、I434M、A577T、R580G/H 和 I581F;表现为中抗的突变基因型有S418R、I424R和A577G;表现为高抗的突变基因型有K216R/E、S217P/L和E420K/G/D。在82个氰烯菌酯抗性突变体中,肌球蛋白5马达域的13个氨基酸残基发生了 18种变异。其中217位和420位氨基酸残基发生突变的频率及导致的抗药性水平最高。从82个测序的突变体中选取突变频率较高、导致低、中、高抗的代表性的菌株,研究了抗药性变异对菌丝生长、无性生殖、有性生殖及致病力的影响。结果表明,抗药性突变体对小麦胚芽鞘的致病力没有显著性变化,无性生殖能力有所降低,从而可能影响抗性菌株在田间的竞争力。比较敏感亲本菌株2021与其肌球蛋白5基因被不同点突变基因同源置换突变体的菌丝生长、温度敏感性、无性和有性生殖、致病力及DON毒素生物合成能力,结果表明各单点突变体保持了与原诱导突变体一致的氰烯菌酯抗性水平;突变肌球蛋白5同源置换突变体与敏感亲本菌株相比,菌丝生长速率和致病力无显著性差异,但各突变体生长速率随温度降低而下降,15℃时达显著差异;无性生殖能力与有性生殖能力降低;DON毒素生物合成能力因不同点突变基因型而异,但氰烯菌酯高抗基因型S217P/L和E420K/G/D的DON毒素含量有所降低。基于亚洲镰孢菌对氰烯菌酯抗药性的变异频率、抗药性水平、病害循环特征及对适合度关键性状的影响分析,氰烯菌酯抗性风险为中高等级。
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