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猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)是引起仔猪腹泻的主要病原之一,主要通过吸附于肠道上皮细胞进行感染。各年龄阶段的猪均可感染,对幼龄仔猪危害最为严重,随着日龄的增长致死率降低。仔猪感染PEDV后,出现以水样腹泻、呕吐和脱水为主要特征的临床症状。PEDV感染可刺激机体免疫系统引起免疫应答,其中分泌型Ig A(secretory Ig A,SIg A)是肠道粘膜中主要的效应分子之一,在粘膜免疫中发挥重要作用。SIg A分子由分泌成分(secretory component,SC)、两分子Ig A和连接链(Joining Chain,J)构成。与血清Ig A和二聚体Ig A(dimer Ig A,d Ig A)相比,SC是SIg A的特有组成成分,因此检测SC可以较好反映体内SIg A的水平。目前PEDV的检测方法主要有病毒分离、酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)、间接免疫荧光(indirect immuninofluorescence,IFA)、病毒中和试验以及PCR等,以上这些检测方法检测时间较长,所需仪器设备昂贵,且需要专业人员操作,而胶体金试纸条正好弥补了以上检测方法的不足。因此本实验我们研制了用于检测PEDV特异性SIg A的胶体金试纸条。本实验以从猪奶中纯化的SIg A为免疫原,免疫6周龄BALB/c小鼠,间接ELISA检测小鼠血清效价,取免疫效价高的小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞用50%PEG进行融合并筛选单克隆阳性杂交瘤细胞,成功筛选到4株稳定分泌抗SIg A单克隆抗体的杂交瘤细胞(其中一株抗SC细胞株,将其分泌的抗体命名为2F9)。IFA和western blot均表明2F9可以与SC发生特异性反应。将分泌抗体2F9的杂交瘤细胞注射小鼠,收集并纯化2F9腹水,间接ELISA检测其纯化后(浓度为1 mg/ml)的效价为1:16000,上清效价为1:200。本实验采用柠檬酸钠还原法制备了颗粒直径为20 nm的胶体金溶液。实验结果显示胶体金与单抗2F9结合的最佳p H为8.2,最佳结合量为9μg/ml,将单抗2F9与胶体金结合作为金标抗体,PEDV作为检测线(最佳浓度为2 mg/m L),SPA作为质控线(最佳浓度为1.5 mg/m L),制备了基于PEDV特异性SIg A的胶体金试纸条。该试纸条具有良好的特异性,用该试纸条对感染PEDV,TGEV和PRo V的猪奶、牛奶、水和PBS进行检测,只有感染PEDV的猪奶出现阳性;敏感性结果表明猪奶样品50倍稀释时为最低检测剂量。试纸条的重复性和稳定性均良好。本研究制备了抗PEDV特异性SIg A单克隆抗体,并基于该抗体研制了用于检测猪乳的胶体金试纸条,为PEDV介导的黏膜免疫反应提供了检测工具。