第一部分CD133的表达在胶质母细胞瘤顺铂药物敏感性及细胞增殖中的作用胶质母细胞瘤(Glioblastoma GB)中的肿瘤祖细胞为CD133阳性(CD133~+)细胞。CD133的表达水平与GB患者疾病严重程度和预后密切相关,CD133高表达者预后更差。另外临床数据显示,CD133高表达的患者对顺铂药物治疗敏感度降低,但CD133如何参与顺铂耐药性的调控目前尚不清楚。因此,靶向抑制CD133的表达可能成为有效治疗GB的策略之一。在本部分研究中,我们比较了CD133~+和CD133~-GB细胞的部分生物学特性,并进一步探讨了CD133在顺铂耐药中的作用。旨在找到CD133参与GB顺铂治疗耐药的相关分子机制,为相应靶向药物的研发提供理论基础。通过流式细胞仪FACS分选技术从GB细胞(T89G和U87MG)中分选出CD133~-和CD133~+细胞,检测顺铂干预后两种细胞的细胞凋亡情况。其次,在顺铂干预前后,检测了肿瘤细胞中CD133的mRNA水平的变化。最后通过细胞增殖实验,分析了CD133~+细胞的增殖能力。结果发现,顺铂干预可显著增加CD133~-T89G和U87MG细胞的凋亡。与CD133~-细胞相比,顺铂干预后CD133~+的T89G和U87MG细胞的凋亡明显减少。这些结果表明,CD133在GB细胞中的表达可能导致其对顺铂治疗的耐药。进一步发现,顺铂干预显著增加CD133~+的T98G和U87MG细胞中的CD133表达。细胞增殖实验表明,CD133~+的T98G细胞增殖能力明显高于CD133~-的T98G细胞。第二部分miR-29a在CD133~+胶质母细胞瘤顺铂耐药中的调控机制研究表明,miR-29家族可作为多种恶性肿瘤生物标志物,并可通过检测血清或肿瘤组织中的miR-29表达水平可评估肿瘤的发生、发展和预后。有越来越多的对miR-29家族成员的研究结果显示,它们在肿瘤生物学的诸多病理生理过程中起重要作用。最近有研究证实,作为预测性生物标志物,无论是单独使用,或是与其它已经证实了的疾病特异性miRNA组合使用,miR-29家族对于恶性肿瘤的早期诊断具有明确的作用。本部分研究拟通过检测miR-29a的水平,同时结合顺铂干预的方法,来探究miRNA的表达与肿瘤细胞耐药的相关性。通过在线工具(http://www.microrna.org)分析了由顺铂调节的CD133靶向miRNA。检测了所有21种候选miRNA的表达水平,并鉴定了miR-29a内与CD133启动子区域的结合位点。在CD133~+的GB干细胞中过表达miR-29a,并用顺铂干预检测细胞凋亡。最后,我们探究了在体内miR-29a对CD133诱导的顺铂耐药性的作用。研究结果显示顺铂干预的CD133~+的GB干细胞中miR-29a(has-miR-29a)显著下调。结合位点的鉴定显示顺铂可通过抑制miR-29a表达来调节CD133的表达。在CD133~+GB干细胞中过表达miR-29a并用顺铂干预检测细胞凋亡中发现过表达miR-29a后,CD133表达降低。miR-29a显著增加顺铂干预后CD133~+GB干细胞的细胞凋亡,表明miR-29a过表达可以逆转CD133~+GB干细胞中的顺铂耐药性。体内实验表明当顺铂干预与miRNA-29a过表达联合处理时,其抑制肿瘤生长的效果明显好于单独使用顺铂的效果。结论:1.CD133的表达可能导致GB细胞对顺铂的耐药性。顺铂显著增加了GB细胞中CD133的表达。2.CD133~+GB细胞对顺铂表现出更强的耐药性。而miR-29a过表达可以逆转CD133~+GB细胞的顺铂耐药性。miR-29a过表达可提高CD133~+细胞对顺铂的敏感性,并可显著抑制CD133~+荷瘤小鼠的肿瘤生长。