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丙酮酸是一种重要的有机酸，广泛应用于化工原料、药物及农用化学试剂的生产以及科学研究。发酵法生产丙酮酸由于其成本低而成为一种极具竞争力和吸引力的方法。本文首先建立了丙酮酸生物合成中中间代谢物的测定方法，有效地测出了细胞内的NAD+、NADH、ATP、ADP和AMP，为后续研究丙酮酸生物合成动力学和能荷水平奠定了基础。对多重维生素营养缺陷型菌株Torulopsis glabrata进行了紫外诱变，得到一株稳定的菌株，为以后的实验奠定了基础。之后对过量合成丙酮酸的过程工艺进行优化，着重研究了添加2，4-二硝基苯酚(2,4-dinitrophenol，DNP)对丙酮酸生物合成动力学和能荷水平的影响，发现细胞的能荷水平不仅影响菌体的生长，而且影响着丙酮酸的生物合成，即细胞能荷水平在发酵的中后期降低可有利于丙酮酸的生物合成。由此得到：16h、24h分两次加入2，4-二硝基苯酚(DNP)，恒温培养时，丙酮酸浓度达到58.9g/L，较空白46.3g/L提高了27.2％。