胎盘组织液对B群链球菌的增菌培养及围产期孕妇B群链球菌的检测和耐药性研究

来源 :广东医学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jhxuxu
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目的:⑴制备胎盘组织液,并探讨胎盘组织液作为一种增菌液对B群链球菌增菌效果及可行性,制定有效、经济的实验室增菌培养方法。⑵探讨胎盘组织液作为一种增菌液对B族链球菌的临床分离效果,对其在围产期孕妇B群链球菌的检出率进行分析。⑶分析B群链球菌临床分离株的耐药性,为预防和治疗B群链球菌所致的疾病提供科学的用药依据。   方法:①胎盘组织液的配制:将新鲜已洗干净的人胎盘(去筋膜、血管)500g放入碎肉机绞碎加蒸馏水至1000ml,放置4℃浸泡过夜;第二天,置于45~50℃加热30分钟,用三层纱布过滤,向滤液加蒸馏水补充至1000ml。再加入5gNaCl,混合溶解后,用1mmol/L NaOH矫正胎盘组织液pH为7.4~7.6。然后每管约5ml分装,加塞后高压蒸气灭菌103.43KPa20分钟。冷后放置2~8℃冰箱保存备用两个月,并取名为T-P增菌液。②胎盘组织液的质量检测:把制好的胎盘组织液每1000ml加入5gNaCl,混合溶解后,用1mol/L NaOH矫正胎盘组织液pH为7.4~7.6,然后加塞高压蒸气灭菌103.43KPa20分钟,随机抽取灭菌后的胎盘组织液做无菌试验。取B链球菌标准菌株培养18~24h的菌落配成0.5麦氏单位,采用倍比稀释法将B群链球菌标准菌株稀释成不同浓度进行增菌试验及活菌计数法,然后在不同的pH值的胎盘组织液中进行试验,然后进行活菌计数,并绘制曲线图,最后对胎盘组织液进行混合菌的增菌效果试验。③用无菌拭子分别采集怀孕35~37周的孕妇的阴道和直肠分泌物,并用含庆大霉素的无菌生理盐水洗涤。分别用血平板直接培养法、Todd-Hewrtt增菌培养法(T-H法)及胎盘增菌培养法(T-P法)培养预处理好的标本,根据B族链球菌培养情况、革兰染色、生化鉴定实验、试剂盒凝集试验和VITEK32细菌鉴定仪共同确定结果,并统计上述三种培养方法的阳性检出率及分析其方法学间的差异。④用纸片扩散法对分离鉴定出的B族链球菌进行药敏实验,并用WHONET5.4软件统计分析。   结果:⑴无菌试验结果显示连续3天血平板均未见有细菌生长;增菌和生长试验表明不同菌量浓度的GBS在T-P增菌液中能很好生长;活菌计数试验显示GBS在T-P增菌液中最佳转种时间段是14~20小时,此时,GBS在胎盘组织液中的Lg活菌数在12.15-12.64之间,为最佳生长时期;pH值试验显示GBS在胎盘组织液中最佳生长pH值是6.5-7.0;胎盘组织液对混合菌的增菌效果试验表明,用含庆大霉素的生理盐水洗涤标本后能分离到B群链球菌。⑵对983例围产期孕妇阴道和直肠试子进行检查,结果显示:血平板直接培养法共检出43例,占4.4%; T-H方法110例,占11.2%; T-P方法116例,占11.8%;其中,直肠部位血平板直接培养法检出33例,T-H方法48例,T-P方法53例,阴道部位血平板直接培养法检出31例,T-H方法64例,T-P方法77例。两部位T-H方法与T-P方法检出率相比,差异均无显著性(差异均无统计学意义)(P>0.005),两部位血平板直接培养法方法与T-H方法、T-P方法检出率相比,差异均有显著性(P<0.005)。⑶983例围产期孕妇检出GBS116株,检出率为11.8%(116/983),其中围产期孕妇阴道和直肠部位同时检出GBS的有82株,占8.3%(82/983),仅阴道部位检出GBS的有79株,占8.0%,仅直肠部位检出GBS的有37株,占3.8%。常见药敏试验:青霉素、头孢曲松、万古霉素未见耐药株,左氧氟沙星的耐药率为21.2%,而红霉素和克林霉素的耐药率较高,分别是69.2%和51.9%。   结论:①本研究所自制的胎盘组织液可作为GBS的增菌液,用于临床围产期孕妇携带的GBS的增菌培养。②自制的胎盘组织液作为增菌液,对GBS的检出率接近Todd-Hewrtt增菌液,因此,能满足临床需要,是一种经济实用的培养基,能够就地取材,制做过程简单,适用基层医院或大中型医院采用。③GBS耐药较严重,对红霉素和克林霉素的耐药率达到69.2%和51.9%,且呈多重耐药,通过定期对GBS耐药性进行分析,为临床合理用药提供理论依据。
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