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目的:黑参为五加科人参(Panax ginseng C.A.Mey.)经反复蒸晒后所得炮制品。目前仍存在炮制工艺参数不明确、质量评价水平较低、炮制品品质参差不齐、药效活性研究少等问题,给其成分研究、药效活性研究以及临床应用带来诸多困难。本文拟建立黑参的最佳炮制工艺、开展成分研究和生物活性初探,为黑参后续药效活性研究和产品开发提供参考。方法:1、文献研究:通过文献数据库CKNI、Pubmed以及Web of Science文献数据库和国家标准文件研究,对黑参的炮制工艺、化学成分、药理作用、应用研究进行综述。2、炮制工艺研究:取检查合格后的鲜参,采用单因素法对蒸制时间、蒸制次数、烘制温度以及烘制时间多个工艺参数进行考察,依据单因素考察结果,利用Design-Expert 8.0软件进行响应面设计,优选黑参的工艺参数。3、质量评价研究:采用高效液相色谱法和台式分光测色法对黑参中的人参皂苷Rg1、Re、Rh1、Rb1、20-(S)-Rg3、20-(R)-Rg3、Rk1、Rg5和色度值(L*、a*、b*以及E*ab)分别进行测定,并利用Person法探究其相关性。此外,通过统计学方法中主成分分析、正交偏最小二乘法分析、聚类分析,筛选黑参炮制过程中相对重要的特征变量。4、黑参化学成分研究:通过HPLC-IT-TOF-MS法建立成分分析方法,于正负离子模式下采集分析,利用LC-MS solution、Analysis Base File Converter和MSDIAL软件进行数据处理分析。总结整理CKNI、Web of science、Pubmed、Chemspider以及Ch EMBL数据库建立最新的人参皂苷成分数据库,分析成分的裂解规律。同时依据质谱所提供的保留时间、精确相对分子质量以及裂解碎片离子信息,进行数据库比对和成分鉴定。5、不同提取物的体外抗氧化活性研究:采用回流提取法和梯度萃取法分别制备黑参水提物、醇提物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物以及醇提水层萃取物,并利用DPPH、ABTS、超氧阴离子自由以及羟自由基清除率法对不同提取物的体外抗氧化活性进行初步研究,进一步利用LSD多重比较法和Probit回归模型比较其抗氧化活性。结果:1、阅读文献,总结并整理出了黑参炮制工艺、化学成分、药理作用、应用研究的综述内容。2、得到的最佳炮制工艺为:鲜参(60g/支)首次蒸制1.5h,70℃烘制18h,之后每次蒸制2h,60℃烘制9h,重复操作6次。3、黑参炮制过程中5种稀有皂苷含量整体呈先上升后下降趋势,与色度值参数a*和E*ab呈极显著正相关,与L*和b*呈极显著负相关;3种原型皂苷整体呈先下降后上升趋势,与L*和b*呈极显著正相关,与a*和E*ab呈极显著负相关。当蒸制次数为7~8时,黑参中稀有皂苷含量达到最高,原型皂苷含量达到最低。依据不同蒸制次数黑参样品中皂苷和色度值的相对变化值,可将蒸制0~9次黑参样品可分为四类:(1)原药材;(2)蒸制1~3次样品;(3)第蒸制4~6和9次样品;(4)蒸制7~8次样品。其中以L*、b*、E*ab、人参皂苷Rb1、Rk1 5个特征变量在样品分类中相对重要。4、建立人参皂苷数据库,包含人参皂苷成分215种,并通过HPLC-IT-TOF-MS法结合多个数据库共鉴定出黑参中化学成分44种,其中皂苷类成分32种,有机酸类6种,其它类6种。5、黑参5个不同提取物均具有较好的DPPH、ABTS和超氧阴离子自由基清除能力,但对羟自由基清除能力较弱。其中黑参醇提物具有较强的抗氧化活性,对DPPH、ABTS以及超氧阴离子自由基均表现出较强的清除能力。黑参水提物具有较强的超氧阴离子自由基清除能力,黑参乙酸乙酯萃取物具有较强的ABTS自由基清除能力,黑参醇提水层表现出较强的DPPH自由基清除能力。结论:实验中确定了稳定可行的黑参炮制工艺;建立了黑参中皂苷和色度的分析方法,完善了黑参质量评价体系。通过HPLC-IT-TOF-MS分析,黑参大量皂苷类成分被鉴定,为黑参的炮制机理研究提供了参考。通过体外抗氧化实验证明黑参具有较强的体外抗氧化能力,可作为潜在的抗氧化剂,用于体内抗氧化活性和作用机制研究。