人类神经母细胞瘤骨侵袭模型的建立及PTHLH蛋白在其中的表达

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目的:神经母细胞瘤(Neuro blastoma,NB)是儿章最常见的颅外实体肿瘤,是婴儿时期诊断的最常见的新生肿物。NB占15岁以下恶性肿瘤病例的6-10%,占所有儿科肿瘤死亡病例的15%[2]。探讨如何建立适合长期研究与治疗的人类神经母细胞瘤(NB)骨侵袭的动物模型以及骨侵袭相关因子PTHLH蛋白在其中的表达,对临床研究NB的侵袭相关有重要的指导意义。   方法:收集10代以内处于对数生长期SH-SY5Y肿瘤细胞,机械分离制成单细胞悬液,以无血清培养基重悬细胞,调整细胞密度,然后采用骨髓腔内注射与肌肉内注射的方法分别种植到无胸腺裸鼠体内。待局部成瘤后,应用外科手术方法将肿瘤及其周围组织取材,经甲醛固定,脱钙,石蜡包埋,切片等步骤后,采用免疫组化的方法比较骨髓腔内成瘤和肌肉内成瘤中PTHLH的表达。分别收集SH-SY5Y细胞及2种成瘤方式的肿瘤组织,充分破碎后,提取其中的蛋白质,应用Western-Blot的方法检测PTHLH蛋白在其中的表达。   结果:   1、SH-SY5Y细胞系细胞在骨髓内直接种植在全部试验动物中可以侵袭骨质形成溶骨性病变:   2、SH-SY5Y细胞系细胞肌肉内直接种植在全部试验动物中可以形成肿瘤,但无法侵袭骨质形成融骨性改变。   3、免疫组化结果显示所成的肿瘤中均有PTHLH蛋白的表达,定位于胞浆。在骨髓内成瘤的组织内表达量较多。   4、Western-Blot结果显示PTHLH的蛋白含量骨髓内成瘤最高,肌肉内成瘤次之,细胞系内含量最低。   结论:SH-SY5Y细胞系细胞在骨髓内和肌肉内均可以成瘤,PTHLH蛋白可能与骨侵袭的过程相关。
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