论文部分内容阅读
近年来糖尿病发病率在全球范围内逐年升高,已经成为严重威胁人类健康的重要慢性疾病之一。糖尿病的主要危害在于其并发症,可累及全身各个重要器官。糖尿病心肌病是糖尿病常见的心血管并发症,早期主要表现为左心室舒张功能紊乱,进一步发展为心力衰竭,致死率高。因此,研究糖尿病心肌病的发病机制,开发治疗糖尿病心肌病的新方法及药物,具有重要的意义。杨梅苷,系五羟基黄酮-3-鼠李糖苷,为一种多酚羟基黄酮苷类化合物,大量存在于杨梅的果实、树皮、树叶及其他多种天然植物中,具有改善微循环、抗炎、抗氧化、抑制细胞凋亡等多种药理活性。本课题通过体内和体外实验研究杨梅苷对糖尿病心肌病的保护作用及其作用机制。体内实验通过饲喂高脂饲料联合腹腔注射STZ建立糖尿病小鼠模型。连续灌胃给药8周,测量小鼠血糖值、体重、摄食量和饮水量;超声心动检测心功能;计算心脏重量/体重比值;试剂盒检测血清心肌三酶水平和心肌组织抗氧化酶活力;HE染色观察心肌组织病理学变化;Masson染色观察心肌间质纤维化情况;Western blot检测心肌组织凋亡相关蛋白的表达变化。体外实验通过建立高糖诱导H9c2心肌细胞损伤模型,MTT法检测细胞存活率;试剂盒测定细胞LDH漏出量、MDA含量以及SOD、CAT、GHS-Px活性;荧光染色检测细胞内ROS水平;JC-1染色检测线粒体膜电位变化;Hochest 33342/PI双染检测细胞凋亡情况;Western blot分析凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax、cleaved Casepase-3、cleaved Casepase-9)以及Akt/Nrf2信号通路相关蛋白(Akt、p-Akt、Nrf2、HO-1、NQO-1)的表达水平。体内研究发现,杨梅苷具有降糖作用,可以缓解STZ糖尿病小鼠体重减轻、多食多饮的症状;提高左心室短轴缩短率和射血分数;降低心脏重量/体重比值;降低血清LDH、CK和AST水平和心肌组织MDA含量,提高心肌组织SOD、CAT和GAH-PX活力;抑制STZ糖尿病小鼠心肌病变、间质纤维化以及心肌细胞凋亡。体外实验发现,杨梅苷可以减轻高糖引起的H9c2心肌细胞损伤,提高细胞活力,减轻细胞形态学改变;减少细胞LDH漏出量和MDA含量,提高细胞内SOD、CAT和GHS-PX活力;抑制高糖诱导的H9c2心肌细胞凋亡、细胞内ROS产生增多以及线粒体膜电位降低;上调Bcl-2的表达,下调Bax、cleaved Casepase-3和cleaved Casepase-9的表达;缓解高糖对Akt磷酸化、Nrf2及其下游蛋白HO-1、NQO-1表达的抑制作用。研究结果表明,杨梅苷可以减缓STZ糖尿病小鼠心肌损伤和功能障碍,抑制高糖诱导H9c2心肌细胞凋亡和氧化损伤。提示杨梅苷对糖尿病心肌病具有保护作用,其作用机制可能是通过激活Akt/Nrf2信号通路来抑制氧化应激和心肌细胞凋亡。