香蒲细胞色素b5基因的克隆和功能研究

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  本论文以香蒲(TyphaangustataBoryetChaub)作为研究材料,从中克隆与TCE(三氯乙烯trichloroethylene)降解相关的基因。植株经过TCE诱导后,提取总RNA,并将其反转录成cDNA。然后,以cDNA作模板进一步合成双链DNA和构建在大肠杆菌中的表达文库;将文库转化大肠杆菌,筛选能在含有TCE的培养基上生长的克隆。获得了多个对TCE有较强抗性的克隆。经分离质粒,测序和同源序列比对发现其中有一个是细胞色素b5类似基因XP141。对氨基酸的序列分析表明,它的N端含有一个血红素结合域而C端是一个跨膜结构域。构建了b5基因在酵母中表达的载体pYES2-XP141。以含有pYES2空载体的酵母作为对照,研究了XPb5转入对酵母对TCE抗性的影响。实验结果表明:香蒲细胞色素b5也能提高酵母对TCE的抗性。构建了植物表达载体PJR1-XP141,并已导入到拟南芥和烟草中。通过检测表明,获得了多个拟南芥和烟草的转基因株系。
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