为提高转基因猪的生产水平,使外源基因能够在猪骨骼肌特异高效地表达,必须构建一个特异高效表达的表达载体,其中启动子的选择非常重要。我们首先改造了无启动子的红色荧光蛋白载体,添加了增强子,IRES等元件以满足分析需要,然后分析猪αactin,CKM,CAPN 3、CA 3、TNNI 2、CASQ 1、GEM等7种骨骼肌特异性表达基因5′调控区的转录因子结合位点,确定需要克隆的区间,经PCR获得目的启动子片段,酶切连入无启动子的报告基因载体中,瞬时转染成肌细胞并诱导分化,同时转染其他组织来源的细胞为对照,包括心肌细胞,肾细胞,内皮细胞,成纤维细胞,肝细胞,研究结果如下:1.αactin,CKM,CAPN 3的启动子仅在诱导分化的肌细胞中有启动活性,在其他来源的细胞中无启动活性2.其他猪骨骼肌特异性基因的启动子在骨骼肌中未检测到启动活性,在其他组织来源的细胞中也未检测到启动活性3. GEM启动子在多种组织来源的细胞中均有启动活性4.得到三种猪骨骼肌特异性表达载体:CMV Enhancer-αactinPromoter-pIRES-DsRed,CMV Enhancer-CKM Promoter-pIRES-DsRed,CMV Enhancer-CAPN3 Promoter-pIRES-DsRed。5.得到了一种广泛性表达的启动子:CMV Enhancer-CKM Promoter-pIRES-DsRed骨骼肌特异性表达载体仅在骨骼肌中有启动活性,而在除骨骼肌外的多种细胞中均无启动活性,可以利用这些启动子在骨骼肌中特异性地启动下游基因的表达,不仅能用于猪转基因生产,还可在哺乳动物转基因应用。