羧甲基壳聚糖及丝素蛋白共混支架的生物相容性研究

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因为同时具有较好的细胞相容性、可降解性及无毒性等特点,丝素蛋白(silk fibroin,SF)和羧甲基壳聚糖(carboxymethyl chitosan,CMCS)在很多研究中被合成利用,用来制作成生物膜或是支架,是目前生物材料研究领域中两种应用比较广泛的材料。此前研究中将羧甲基壳聚糖和丝素蛋白混合制成多孔生物支架,结合两者不同的力学、生物学特性,制备出一种仿生细胞外基质的生物支架,更加有利于细胞生长,我们将丝蛋白纳米纤维和新鲜丝素蛋白溶液(SF/SN)按照1:15的比例进行混合,再将羧甲基壳聚糖(CMCS)按照不同的比例加入上述混合液中,用冻干机通过冷冻干燥的方法先制备出多孔生物支架材料,然后用EDC-NHS-甲醇溶液对支架进行交联,制备出支架,该支架具有纳米纤维微结构以及与细胞外基质类似的蛋白质-多糖复合成分,且不溶于水。通过对不同比例混合支架进行SEM扫描、溶胀率分析、压缩模量测试、DSC分析、骨髓间充质干细胞(rBMSDs)培养等,结果表明:SF/CMCS混合支架是一种具有良好的热稳定性、成孔性、溶胀率的仿生支架,并且在CMCS/SF=1:4的时候,该支架最有利于细胞增殖。通过此前的实验,本次实验将CMCS/SF=1:2、1:4、1:6、1:8支架同时植入SD大鼠皮下,同时植入无CMCS的空白的SF支架作为对照组,分别于1周,2周,4周,8周取出,进行免疫组化、masson及HE染色,在镜下观察组织和血管长入、胶原沉积和炎性细胞浸润,利用SPASS统计软件,对数据集的平均值比较采用one way ANOVAs分析,结果表明,随着时间的增加,SF/CMCS混合支架中血管数目逐渐增多,和对照组相比较具有显著性差异,P<0.01有统计学意义。通过此次实验表明,丝素蛋白/羧甲基壳聚糖(SF/CMCS)混合支架能够更好地诱导组织长入,此次发明的结果表明通过组成成分和纳米结构的改进,我们可以人为通过ECM模拟生物相容性,对生物材料的微环境加以控制,这种新的生物材料制备策略提供了更加优良的生物材料系统。
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