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目的:胃癌是全球高发恶性肿瘤之一，是消化系统最常见恶性肿瘤。晚期胃癌最常用的治疗方法是化疗，虽然紫杉类、铂类及新型氟尿嘧啶类化疗药物的出现使胃癌化疗疗效有所提高，但患者对化疗药物原发或继发的多药耐药(multidrugresistance，MDR)现象的存在，使患者很难获得长期生存。因此，寻找胃癌多药耐药发生原因并有效逆转胃癌多药耐药显得尤为重要。近年来，一类新的内源性基因表达调控因子—microRNA（miRNA）得以发现并日益受到关注。研究证实miRNA是转录后基因表达调节的关键分子。既往研究显示胃癌耐药细胞株中miR-200bc/429低表达，其靶蛋白BCL2和XIAP表达上调，使得胃癌细胞凋亡率下降导致耐药[1]。miR-129-5p通过CpG岛甲基化，增加了药物外排的ABC转运蛋白的表达，导致化疗药物外排增加，从而导致胃癌多药耐药[2]。 目前对miRNA在耐药方面研究主要是通过检测耐药细胞及其亲本细胞之间差异表达miRNA，进一步对其调控的下游靶基因进行研究。miR-103是微小RNA家族一员，其通过调控下游靶基因，参与多种肿瘤细胞的增殖、侵袭及迁移等。Zheng等[3]研究证实miR-103通过与LATS2的3非编码区结合，抑制LATS2的表达，从而促进结肠癌细胞的增殖、侵袭和迁移。Fu等[4]研究证实miR-103可以通过下调癌基因PDCD10，抑制前列腺癌细胞增殖和迁移。而miR-103是否在胃癌多药耐药中发挥调控作用尚未见报道。 我们的前期研究证实，泛素连接酶Cbl-b与胃癌耐药表型相关，同时对胃癌敏感细胞和耐药细胞中Cbl-b的细胞内定位进行研究，结果发现敏感细胞中Cbl-b主要表达在胞浆，而耐药细胞中Cbl-b主要表达在胞核。胞浆中的Cbl-b主要是通过抑制PI3K/Akt和脂筏，影响P-gp的表达和功能，从而逆转胃癌耐药。但是这只能部分逆转耐药，所以我们推测，定位在胞核内的Cbl-b可能对核内的其他分子具有调节作用。 本研究的目的是探讨Cbl-b能否通过调控miR-103进而调节胃癌多药耐药。研究结果将有助于阐明胃癌多药耐药的作用机制，同时也可能为有效逆转胃癌多药耐药，寻找新的治疗思路及潜在的药物作用靶点。 研究方法:1.通过miRNA芯片检测胃癌耐药细胞系SGC7901/ADR及其亲本细胞系SGC7901的miRNA表达谱，找出差异表达miRNA。2.应用qRT-PCR法对miRNA芯片结果进行验证。3.利用细胞转染，miR-103拟似物上调SGC7901/ADR细胞中miR-103表达，miR-103抑制物下调SGC7901细胞中miR-103表达。4.通过MTT法，检测miR-103对SGC7901/ADR及SGC7901细胞体外药物敏感性的影响。5.通过Western Blot检测两种细胞系SGC7901/ADR、SGC7901中caveolin-1、Cbl-b蛋白表达水平。6.将野生型Cbl-b质粒转染至SGC7901/ADR，建立稳定转染细胞系，利用qRT-PCR法对转染后miR-103表达水平进行检测，用MTT法对转染后细胞对阿霉素的敏感性进行检测。 结果:1.15种miRNA在SGC7901/ADR及SGC7901细胞中差异表达，其中在SGC7901/ADR细胞中表达上调的miRNA包括miR-10a、miR-1254、miR-17、miR-297、miR-338-5p、miR-523，表达下调的miRNA包括miR-103、miR-30e、miR-30b、miR-424、miR-520f、miR-587、miR-628、miR-675、miR-760，其中miR-103下调最显著（0.32±0.04）。2.qRT-PCR结果显示，miR-103在胃癌耐药细胞系SGC7901/ADR中的表达较SGC7901细胞显著降低，与芯片检测结果一致。3.MTT结果显示:上调miR-103表达，SGC7901/ADR对阿霉素敏感性增加，IC50下降（由18.83±0.32μg/ml下降到4.54±0.29μg/ml）;下调miR-103表达，SGC7901细胞对阿霉素敏感性下降，IC50升高（由1.65±0.03μg/ml上升到15.27±0.26μg/ml）。4.WesternBlot结果显示，SGC7901/ADR细胞中caveolin-1高表达，过表达miR-103后caveolin-1表达下调;SGC7901细胞中caveolin-1低表达，抑制miR-103表达后caveolin-1表达上调。5.Cbl-b在SGC7901/ADR细胞中低表达，在SGC7901细胞中高表达。与阴性对照相比，稳定过表达Cbl-b的SGC7901/ADR细胞中miR-103表达显著上调（由1.1±0.11μg/ml上升至2.25±0.24μg/ml）。同时，SGC7901/ADR对阿霉素敏感性增加，IC50下降（由18.25±0.15μg/ml降至11.31±1.09μg/ml）。 结论:1.miR-103通过负调控caveolin-1表达，增加SGC7901/ADR细胞对阿霉素敏感性，从而逆转胃癌多药耐药。2.miR-103受Cbl-b正向调控，过表达Cbl-b可提高miR-103表达，增加SGC7901/ADR细胞对阿霉素敏感性。