双侧内脏大神经切断对犬急性坏死性胰腺炎肝损伤的影响

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目的:  1. 应用开腹经十二指肠副乳头向犬主胰管泵入牛黄胆酸钠制备理想、可靠的急性坏死性胰腺炎( Acute necrotizing pancreatitis ,ANP)所致的肝损伤模型;  2. 探讨双侧内脏大神经切断对ANP肝损伤的影响及可能的机制。  方法:  选取24只健康的成年杂种犬,随机分为假手术组(Sham operation group, SO 组,n=8)、ANP 组(n=8)和 ANP+内脏大神经切断组(Great splanchnic nerve transection group, GSNT 组,n=8)。术后观察各组犬的一般状况,如犬的一般生命体征,是否合并发热、呕吐、生存状况等;分别于术前 2h、术后12h、24 h、3d、5d、7d 抽取外周静脉血,检测血清淀粉酶( Amylase , AM Y)、ALT、AS T、TN F-α 水平;术后第 7 d 处死动物取胰腺、肝脏组织,胰腺及肝脏病理改变情况分别经肉眼、光镜下观察并进行病理评分, p-NF-κBp65 蛋白在肝组织中的表达以 Western blot 法检测。以 SPSS19.0 软件进行统计学处理,所有数据都用均值±标准差(x__±s)表示。中途死亡的不纳入统计学检验,仅作死亡分析;术前 2 小时各组实验动物的血清 AM Y、ALT、AS T水平以及术后各组实验动物的胰腺脏病理评分、肝脏病理评分、肝脏 p-NF-κBp65 蛋白的表达水平的比较采用单因素方差分析进行检验;用重复测量的方差分析评估术后各组实验动物的血清 AMY、ALT、AST 水平差异,采用 LSD 法进行组间的两两比较。P<0.05 ,差异有统计学意义。其中ANP犬中途死亡2只,仅作死亡原因分析,不纳入统计学检验。  结果:  1. SO组犬术后一般情况较好,中途无死亡;ANP组犬术后一般情况差,精神不振、呼吸加快、心率增高、体温高,尿量少,术后出现明显的恶心、呕吐,长时间无法进水,腹水较多,中途死亡 2 只,其中 1 只于术后第 3 天因伤口裂开,肠管嵌顿、破裂死亡,1只于术后第 5天因感染性休克、多器官功能衰竭死亡。GSNT组犬一般情况较差,但较ANP组动物症状较轻,中途无动物死亡。  2. 术前2小时三组动物血清 AM Y、ALT、AST的平均表达水平之间均无显著性差异,无统计学意义(P>0.05)。术后 ANP 组、GSN T 组与 SO 组相比,血清 ALT、AS T 的表达水平以及胰腺及肝脏在光镜下的病理评分均显著升高(均P<0.05)。  3.术后 GSNT 组 ALT、AST以及胰腺及肝脏病理评分、肝脏 NF-κB蛋白表达水平均较 ANP 组显著降低(均 P<0.05);ANP 组与 GSN T 组血清 AMY表达的平均水平无明显差异(P>0.05)。  结论:  1. 急性坏死性胰腺炎时血浆 AMY、ALT、AST 以及肝脏中核因子 NF-κB活性显著升高,胰腺和肝脏病理损伤加重;  2. 犬主胰管牛黄胆酸钠泵入法可以制备稳定、可靠的ANP肝损伤模型;  3. 急性坏死性胰腺炎时切断双侧内脏大神经可降低血浆 ALT、AS T 的水平以及肝脏组织中 NF-κB 的活性,还可减轻胰腺及肝脏的病理损伤,而这其中可能与NF-κB的活性的下调有关。
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