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佐剂是疫苗领域的重要研究内容之一。近年来,各种纳米材料,如金纳米颗粒(Gold nanoparticles,GNPs),在生物医学领域展现出良好的应用前景。已有一些研究表明GNPs能增强体液甚至细胞免疫应答,有望作为新型佐剂。已知其佐剂效果与粒径、形状、表面修饰等密切相关,而关于抗原与GNPs结合方式对免疫效果的影响还未见报道。本论文拟采用一步法制备模式抗原卵清蛋白(Ovalbumin,OVA)修饰的金纳米材料(OVA@GNPs),通过与抗原OVA和GNPs的物理混合物(OVA+GNPs)的对比研究,探究GNPs与抗原的结合方式对动物产生免疫应答的作用和影响,研发一种简便、易行、低毒、稳定性高、能高效地产生免疫应答的以GNPs作为疫苗佐剂的方法。分别制备OVA与GNPs的物理共混物(OVA+GNPs)以及共价复合物(OVA@GNPs),并对OVA@GNPs进行处方优化,以确定能使OVA尽可能完全结合于GNPs表面的金离子浓度;采用聚丙烯酰胺凝胶电泳、紫外-可见吸收光谱、透射电镜、原子力显微镜、红外光谱和圆二色谱等分析手段进行理化性质和结构信息的表征。考察和比较样品在体外稳定性、细胞毒性及细胞摄取方面的差异。用ELISA检测皮下接种免疫小鼠血清中特异性IgG抗体的滴度及其亚型,推测免疫应答的可能类型,并对免疫小鼠的主要脏器进行切片染色观察。进一步地,对经皮免疫后动物的皮肤进行切片染色观察,并对血清中的特异性抗体加以检测。通过处方优化,制备共价复合物OVA@GNPs,当OVA浓度为1 mg/mL时,金离子的最佳浓度为1.2 mM。通过聚丙烯酰胺凝胶电泳等表征手段证明在OVA+GNPs中,OVA与GNPs主要以物理的分子间作用力结合,且几乎不引起OVA结构改变;而在OVA@GNPs中,OVA与GNPs属于共价结合,OVA的二级结构存在明显改变,但对其与OVA抗体的体外结合几乎无影响。体外稳定性研究结果表明,两种抗原纳米金复合物均具有良好的体外稳定性,且OVA@GNPs储存稳定性优于OVA+GNPs。在一定浓度范围内,未观察到两者有明显的细胞毒性。皮下免疫接种后,OVA@GNPs组小鼠的OVA特异性抗体水平显著高于OVA组以及OVA+GNPs组,并且与铝佐剂组相当,用量为铝佐剂的1/5。IgG抗体分型检测结果显示,各组血清中抗体均以IgG1为主,暗示免疫应答以T细胞依赖性体液免疫为主。免疫小鼠的各主要脏器经苏木素-伊红染色未见明显组织病理改变,两种纳米粒子均具有较好的体内安全性。透皮及经皮免疫实验结果显示,小粒径GNPs作为蛋白质透皮载体的能力非常有限,壳聚糖以及卡波姆凝胶对经皮免疫的积极作用非常有限。本论文通过对两种抗原纳米金复合物OVA@GNPs和OVA+GNPs进行对比研究,证明抗原与GNPs的结合方式会影响其体外稳定性及体内免疫效果。一步法制备OVA和GNPs的共价复合物能有效诱导小鼠产生与铝佐剂相当的免疫应答,制备方法简单可行,且可同样适用于其他抗原,为未来新型佐剂的开发提供了参考。