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肝纤维化,是一种发生于慢性肝病后的可逆性损伤愈合反应,各种慢性肝病向肝硬化发展的所必经病理过程。目前,对于许多慢性肝病的治疗尚无理想的针对治疗措施,如乙型肝炎病毒所导致的病毒性肝炎。从病理变化来说,肝纤维化是可逆的,而肝硬化则是不可逆的,再加上我国是病毒性肝炎流行的高发区,据最近统计资料显示,我国目前有肝病患者已达2000多万,肝纤维化在我国的发病率较高,是我国人民必须严肃对待的一个健康问题。因此,寻找防治肝纤维化的有效方法和有效药物,是我国人民的迫切要求,具有深远的意义和重大的社会价值。乙型肝炎是由乙型肝炎病毒（HBV）感染所致,全世界约有3亿人是HBV携带者,而HBV携带者发生肝纤维化、肝硬化和肝癌的危险性比非携带者高出上百倍。我国是乙肝高发区,约有1.2亿HBV携带者。但是由于乙型肝炎的临床表现并不明显,再加上大多数病人并不重视而导致迁延失治,往往会让病情发展为慢性肝炎和肝纤维化。慢性肝炎（HBV所致）的存在是引发肝纤维化的重要原因,单单治疗肝纤维化是无法使之完全治愈的,就算治疗得当也无法排除复发的危险。因此,抗慢性肝炎肝纤维化应作为一个整体进行治疗,方是彻底治愈的有力保证。国内外在对慢性肝炎及肝纤维化的机理研究方面已取得了一定进展。但是在其临床治疗领域,却依然未能取得明显的进步。加上目前临床现有的药物,其疗效并不够理想,而且有些药物普遍存在副作用较大,费用较高的缺点。因此国内外的研究者都在努力寻找疗效确切、价格低廉、毒副作用小的防治肝纤维化药物,以便能阻止慢性肝炎进一步发展,演变为肝纤维化的进程,最终治愈大多数慢性肝炎及肝纤维化。因此本课题以加味三仁汤作为实验药物,展开针对慢性肝炎及肝纤维化的研究,拟采用免疫组化、细胞培养技术、流式细胞术、分子生物学方法（RealTime-PCR技术）等技术对鸭乙肝、大鼠免疫性肝纤维化、HSC细胞以及2.2.15细胞的影响等方面探讨其抗慢性肝炎及抗肝纤维化的作用及机理,为该方进一步的临床及开发应用提供实验依据。1.利用DHBV阳性绿头鸭作为研究对象,观察加味三仁汤对其血清中DHBV-DNA水平的影响。结果显示:模型组鸭血清中DHBV-DNA水平升高,与正常组比较有显著性差异（P＜0.01）,加味三仁汤水提液大剂量、小剂量以及大剂量醇提液对DHBV-DNA均有明显的抑制作用（P＜0.05或P＜0.01）,而加味三仁汤的小剂量醇提液则没有显著的抑制DHBV-DNA作用。2.以加味三仁汤作用于2.2.15细胞,观察其对2.2.15细胞HbsAg及HbeAg分泌的影响。结果显示,浓度为1、0.5、0.25、0.125、0.625、0.3125mg/mL的加味三仁汤水提液对2.2.15细胞HbsAg和HbeAg分泌抑制率分别为85.36%、79.72%、75.81%、69.65%、62.14%、30.56%以及90.17%、83.26%、76.34%、46.86%、20.32%、0.36%。药物剂量与HbsAg和HbeAg分泌抑制率呈现递增关系,其中随着剂量增加,其中药物对HbsAg的抑制更为明显。3.观察加味三仁汤对2.2.15细胞HBV-DNA表达的影响。结果表明,加味三仁汤具有明显的抑制2.2.15细胞HBV表达的作用,其中1 mg/mL、0.5 mg/mL及0.25 mg/mL浓度的加味三仁汤水提液效果更优于阳性药物。4.通过对DMN肝纤维化大鼠模型,观察加味加味三仁汤对肝组织肝HA、LN、IVC、PCIINP及HyP的影响。模型组及各给药组血清HA、LN、IVC、PCⅢ及HyP的水平均升高,与正常组比较,有显著性差异（P＜0.01）。加味三仁汤水提大、小剂量组与模型组比较,血清HA、PCⅢ、LN、CIV及HyP水平均明显下降（P＜0.05或0.01）,且随剂量增加效果也相应增强;加味三仁汤醇提大剂量组与模型组比较,血清LN、IVC、PCⅢ及HyP的水平有一定程度下降,但无显著意义（P＞0.05）。加味三仁汤醇提小剂量组与模型组比较,血清PCⅢ、CIV、HyP水平有下降,但无显著意义（P＞0.05）。鳖甲软肝片组血清HA、PCⅢ、CIV水平较模型组无显著差异（P＞0.05）。5.通过对DMN肝纤维化大鼠模型,观察加味三仁汤对DMN肝纤维化大鼠肝组织形态学的影响:（1）HE染色;（2）α-SMA免疫组化;（3）Ⅰ型胶原免疫组化。本实验表明,从肝小叶破坏、假小叶形成、胶原纤维增生等肝脏结构的客观改变出发,认为加味三仁汤可减轻肝纤维化的程度,改善肝脏结构,促进ECM降解,从而治疗实验性肝纤维化。6.观察加味三仁汤对大鼠肝组织TGFβ1及PDGF-B表达抑制的影响。结果显示模型组及各给药组血清TGF-β1及PDGF表达增加,与正常组比较,有显著性差异（P＜0.01）。加味三仁汤水提液组均能显著抑制TGF-β1和PDGF的表达（P＜0.05）,且优于阳性药物,其中尤以加味三仁汤水提大剂量组最为明显（P＜0.01）,且随剂量增加效果也相应增强;加味三仁汤醇提小剂量组剂量组与模型组比较,对于TGF-β1和PDGF表达抑制的影响有显著意义（P＜0.05）。加味三仁汤醇提组与模型组比较,对血清TGF-β1的影响无显著意义（P＜0.05）。7.观察加味三仁汤对肝纤维化大鼠血清TNF、IL-1及IL-6的影响。结果提示,加味三仁汤水提液组均具有显著降低大鼠血清中TNF-α、IL-1以及含量的作用（P＜0.05或P＜0.01）。其中水提液大剂量组的效果更是优于阳性药物组。而加味三仁汤醇提大剂量组对大鼠血清中的TNF-α和IL-1有明显的降低作用,但对IL-6则无明显作用。而小剂量醇提液对大鼠血清中的TNF-α、IL-1和IL-6则无明显作用。8.探讨加味三仁汤对HSC-T6 TIMP-1和MMP-2表达的影响。结果显示40mg/mL和20mg/mL浓度的加味三仁汤能有效降低TIMP-1和MMP-2mRNA的水平,并随着浓度降低而减弱。9.观察大鼠肝组织和HSC中的Fas/FasL表达与加味三仁汤的干预作用。实验发现,加味三仁汤能明显上调大鼠肝组织及HSC Fas/FasL基因mRNA的表达,而且其水提液对Fas/FasL的上调作用均优于阳性药物组。10.探讨体外培养HSC凋亡与加味三仁汤的干预作用。实验提示:加味三仁汤和丹参注射液均可诱导HSC凋亡,其中加味三仁汤水提液40mg/ml和20mg/ml剂量组细胞凋亡明显,并优于丹参注射液组。此外,加味三仁汤组对HSC的凋亡促进还呈剂量依赖。11.探讨加味三仁汤对肝纤维化大鼠组织纤维酶原激活剂抑制剂、组织型纤维酶原激活剂的影响。结果显示:与细胞对照组比较,加味三仁汤可调节uPA及PAI-1的表达。其中浓度为40mg/mL以及20mg/mL的加味三仁汤水提液对HSC-T6细胞uPA及PAI-1的的表达调节优于其它各组。而在大鼠血清uPA及PAI-1的表达抑制中,加味三仁汤水提液组均优于其他各组。