目的:胃肠积热是无形热邪或有形热结壅于胃肠,而致胃肠气分热盛的证态,其形成的主要原因是饮食积滞,蕴而化热。胃肠积热常见于小儿,与小儿肺炎的发生和发展密切相关。小儿肺炎患者也多有胃肠积热表现,故临床应予以肺胃同治法治疗。银莱汤以肺胃同治法组方,由金银花、连翘、黄芩、鱼腥草、前胡、莱菔子和全瓜蒌组成,全方在上可清宣太阴肺经之热邪,在下可清泄阳明胃肠之积滞,共奏肺胃同治之效,临床用于治疗小儿肺炎兼有胃肠积热者,疗效显著。小儿肺炎是由不同病原体或其他因素所致的肺部炎症,是儿童呼吸系统常见疾病。引起小儿肺炎的病原体主要有细菌、病毒、支原体、衣原体等,但各种病原体所致的肺炎均以发热、咳嗽、气促、肺部固定湿啰音等为典型表现,可参考中医的小儿肺炎喘嗽辨证治疗。脂多糖(Lipopolysaccharides, LPS)是革兰阴性菌内毒素的主要成分,可介导机体的炎症反应,且因其毒性较弱,各菌间LPS产生的炎症反应类似,无明显特异性,可用于非特异性肺炎模型的制备。前期研究运用病因学造模方法,成功复制了以高热量高蛋白饮食为特点的胃肠积热小鼠模型,并在此基础上研究胃肠积热对肺炎小鼠的影响,以及银莱汤的干预作用,发现胃肠积热可导致肺炎小鼠肺指数增加,肺损伤加重,而银莱汤可明显减轻胃肠积热复合肺炎模型小鼠的肺损伤情况。之后分别从炎症、免疫和肠黏膜屏障等方面对胃肠积热的致病机制和银莱汤的作用机制进行了探讨。但相关研究仍缺乏系统性的评价,其有关机制仍有待进一步明确。本课题在前期研究基础上,拟运用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)蛋白质组学技术,观察肺炎模型小鼠和胃肠积热复合肺炎模型小鼠肺组织蛋白质组学特征,并在此基础上进一步比较分析胃肠积热对肺炎小鼠肺组织蛋白表达的影响,以及银莱汤对胃肠积热复合肺炎小鼠肺组织蛋白表达的影响,以期从肺组织蛋白质组学层面部分阐明胃肠积热影响小儿肺炎发生发展的物质基础,以及银莱汤治疗胃肠积热复合肺炎的作用机制,从而为小儿肺炎的预防和治疗提供一定的实验依据。方法:通过LPS雾化吸入诱导小鼠肺炎模型(M1组),通过高热量高蛋白饮食复合LPS雾化吸入诱导小鼠胃肠积热复合肺炎模型(M2组),以银莱汤为胃肠积热复合肺炎模型的干预药物(Y组),观察三组小鼠脾指数、胸腺指数、肺指数和肺组织病理变化情况,之后运用iTRAQ标记蛋白质组学技术,观察各组小鼠肺组织蛋白表达情况,并进一步分析各组间蛋白差异表达情况。结果:1.肺指数、脾指数和胸腺指数的变化与正常组比较,M1组和M2组的肺指数明显升高(p<0.05);与M1组比较,M2组肺指数明显升高(p<0.05);与M2组比较,Y组肺指数降低,但差异不明显(p=0.458)。与正常组比较,M2组脾指数明显升高(p<0.05),M1组脾指数升高,但差异不明显(p=0.39)。与M1组相比,M2组脾指数升高,但差异不明显(p=0.204)。与M2组比较,Y组脾指数明显升高(p<0.05)。与正常组比较,M1组和M2组胸腺指数降低,但差异不明显(p>0.05)。与M1组比较,M2组胸腺指数降低,但差异不明显(p>0.05)。与M2组比较,Y组胸腺指数升高,但差异不明显(p>0.05)2.肺组织病理变化M1组小鼠肺组织出现肺泡结构破坏,肺间隔增宽,存在肺泡融合并伴有炎性细胞浸润。M2组小鼠肺组织病变程度较M1组重,有明显肺实变,有大量炎症细胞浸润。Y组小鼠肺组织病变程度较M2组减轻,肺间隔增厚减少,周围间质内炎性浸润减少。3.肺组织蛋白表达情况本次实验共鉴定出2626个可信蛋白(peptides≥1,且在三次实验中可重复出现)。以p<0.05,差异变化倍数(Fold Change, FC)大于1.5为标准筛选各组间差异蛋白。与正常组相比,M1组小鼠肺组织中有344种差异表达蛋白,其中224种表达上调,120种表达下调;其涉及有显著变化(p<0.05)的生物学过程有1287个,细胞组分有197个,分子功能有234个,KEGG通路有26个。其中生物学过程主要有机体对有机物的反应、细胞因子响应、细胞对化学刺激的反应、机体对化学物质的反应、细胞对细胞因子刺激的反应、机体对外部刺激的反应、防御反应和免疫系统进程等;相关的信号通路主要有细胞外基质相互作用、白细胞迁移、FcγR介导的吞噬作用、补体系统、抗原提呈和加工、核糖体、氨基酰转运RNA合成、蛋白质在内质网上的加工、氨基酸合成、碳代谢、糖酵解/糖异生和磷酸戊糖途径等。与正常组相比,M2组小鼠肺组织中有521种差异表达蛋白,其中273种表达上调,248种表达下调;其涉及有显著变化(p<0.05)的生物学过程有1158个,细胞组分有242个,分子功能有234个,KEGG通路有39个。其中生物学过程主要有生物附着、细胞粘附、机体对有机物的反应、机体对化学物质的反应、免疫系统进程、防御反应、细胞因子响应、有机氮化合物代谢过程、肽代谢过程、气体运输、小分子代谢和氧化还原反应等;而相关的信号通路主要有细胞外基质相互作用、黏着斑、细菌入侵上皮细胞、白细胞迁移、吞噬体、核糖体、碳代谢和三羧酸循环等。与M1组比较,M2组小鼠肺组织中有164种差异表达蛋白,其中14种表达上调,150种表达下调,其涉及有显著变化(p<0.05)的生物学过程有588个,细胞组分有131个,分子功能有144个,KEGG通路有20个。其中生物学过程主要有小分子代谢过程、气体运输、嘌呤核糖核苷酸代谢过程、核糖核苷酸代谢过程、磷酸核糖代谢、细胞粘附和生物附着等。而相关信号通路主要有氧化磷酸化、三羧酸循环、丁酸甲酯代谢、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸降解、核糖体、细胞外基质相互作用、黏着斑、补体系统和血管平滑肌收缩等。与M2组比较,Y组肺组织中有87种差异表达蛋白,其中73种表达上调,14种表达下调,其涉及有显著变化(p<0.05)的生物功能有403个,细胞组分有112个,分子功能有114个,KEGG通路有21个。其中生物过程主要有柠檬酸代谢过程、细胞呼吸、三羧酸代谢过程、三羧酸循环、有机化合物氧化供能以及前体代谢物和能量的产生等。而相关的信号通路主要有三羧酸循环、氧化磷酸化、脂肪酸代谢、色氨酸代谢、赖氨酸降解、缬氨酸亮氨酸异亮氨酸降解和核糖体等。结论:1.胃肠积热能够加重LPS所诱导的肺炎模型小鼠肺部炎症损伤,而银莱汤能够减轻胃肠积热复合肺炎模型小鼠的肺部炎症损伤。2.LPS雾化吸入不仅能够引起肺组织炎症,还可以影响蛋白质的合成和碳水化合物的代谢。3.胃肠积热可能通过影响小鼠的物质能量代谢,进一步影响其免疫功能,进而加重LPS所致的炎症损伤。4.银莱汤可能通过调节胃肠积热复合肺炎小鼠的物质能量代谢,达到其治疗作用。5.三羧酸循环功能的改变可能是胃肠积热致病作用和银莱汤治疗作用的关键环节之一。