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目的:地中海贫血(简称“地贫”)是一种全球常见的常染色体单基因遗传病,不同基因型临床表现可不相同。轻型地贫可为小细胞低色素轻度贫血,中间型及重型地贫可致中、重度溶血性贫血,还可伴有黄疸、肝脾肿大、发育迟缓等表现。重型地贫患儿甚至可于出生前或出生后死亡。目前仅可通过造血干细胞移植或基因编辑治愈,但配型困难,且价格昂贵,临床上暂不能普遍运用。在我国,地贫好发于长江沿岸及以南流域,如广西、广东、海南、云南、福建、四川、重庆等地区,各地区地贫携带率差异较大,为3.3%-24.07%不等。不同地区、不同人群存在不同的地贫基因突变谱。目前运用间隙-聚合酶链式反应(gap-polymerase chain reaction,Gap-PCR)技术及反向斑点杂交技术(reverse dot blot,RDB)可检测24种常见突变,但仍余有3%的风险还存在其他的突变未能检测到。香港型地贫(HongKongαα,HKαα)则是一种未在检测范围内较为罕见的α-地贫,即同一染色体上同时包含了-α3.7及αααanti-4.2。由于目前常规检测试剂盒中缺乏对αααanti-4.2三联体的检测,所以-α3.7/αααanti-4.2及HKαα地贫携带者常被误诊为-α3.7/αα。当-α3.7/αα的配偶为--SEA/αα时,他们的后代有1/4概率为-α3.7/--SEA,为血红蛋白H病(Hemoglobin H,Hb H)。Hb H病临床表现不一,可为小细胞低色素性轻度贫血至重度贫血。严重者发育迟缓、脾大明显,可因合并感染而导致病情加重。因此孕妇需进行产前诊断明确基因型。而HKαα既不属于-α3.7缺失型,亦不属于αααanti-4.2三联体,HKαα/--SEA主要表现为轻型(α-地贫,将HKαα诊断为-α3.7缺失型地贫基因携带者,当其配偶为--SEA/ααα时,则因需明确诊断而进行不必要的有创检查,增加了流产风险及经济负担,给孕妇带来了精神压力。而当患者基因型为-α3.7/αααati-4.2时,首先,无论其配偶是否为地贫患者,地贫基因均会遗传给下一代。再者,当合并β-地贫时,因αααati-4.2可使α-珠蛋白链的合成增加而加重β-地贫的表型。因前两者的临床表现、遗传咨询和产前诊断与-α3.7/αα不同,所以检出αααanti-4.2及HKαα基因型迫在眉睫。而目前HKαα的经典检测方法——巢式PCR,无法区分HKαα/αα、HKαα/-α3.7、HKαα/αααanti-4.2、HKαα/αααanti-3.7、HKαα/HKαα 等,而基因型与临床表现、遗传概率相关,故对HKαα基因型鉴定十分必要。本研究主要通过对四川地区人群进行地中海贫血基因检测,了解该地区地中海贫血基因分布情况,为临床医师提供遗传咨询和产前诊断资料。同时,建立一种鉴定-α3.7缺失型地贫基因携带者的αααanti-4.2与HKαα基因型的方法。方法:收集2017年7月至2019年10月于四川省人民医院就诊并进行地贫基因型检测样本。常规地贫基因检测采用核酸自动提取仪提取DNA,αααanti-4.2及HKαα基因检测采用康为世纪及Qiαgen DNA提取试剂盒提取DNA;Gαp-PCR及RDB技术检测24种常见地贫突变;采用Primer 3对HKαα基因检测所需引物进行设计,由上海生工生物有限公司合成引物;对筛查结果为-α3.7缺失型地贫基因携带者进行αααanti-4.2基因分析,αααanti-4.2阳性者采用巢式PCR及多重连接探针依赖扩增(multiplex ligation-dependent probe amplification,MLPA)技术进行 HKαα 基因型检测。采用统计描述的方法描述常规地贫基因型分布、巢式PCR及MLPA技术检测 αααanti-4.2 及 HKαα 结果。结果:1.5488例四川受检者中,检出地贫携带者和患者共2544例,地贫基因型38种。其中,α-地贫1190例(46.78%,1190/2544)、β-地贫1286例(50.55%,1286/2544)、α复合β地贫 68 例(2.67%,68/2544)。其中,α-珠蛋白基因突变9种,以--SEA突变最为常见,占所有α-珠蛋白基因突变的69.77%;β-珠蛋白基因突变 13 种,以 CD17(A>T)、CD41-42(-TTCT)、IVS-2-654(C>T)突变等位基因为主,依次占所有β-珠蛋白基因突变的32.92%、28.88%、24.12%。1190 例 α-地贫中,检出 19 种基因型。以--SEA/ααα为主,占α-地贫2/3以上,为71.76%。1286例β-地贫中,检出18种基因型。以βcd17/βN(33.28%)、βd41-42/βN(28.46%)、βIVS-2-654/βN(23.79%)为主,共占β-地贫的85.53%。68例α复合β地贫中,前三位为-α3.7/ααα复合βcd17/βN(19.12%)、-α3.7/αα 复合βcd41-42/βN(17.65%)、-α3.7/αα 复合βIVS-2-654/βN(11.76%)。2.通过 Gap-PCR 技术检测出 227 例-α3.7/αα 和 2 例HKαα疑似者。联合运用巢式PCR和MLPA对这229例进行αααanti-4.2与HKαα 基因型分析,结果显示 15 例 HKαα/αα,2 例 HKαα/αα 伴βIVS-2-654/βN,1 例 HKαα/αα伴βcd41-42/βN,1 例 HKαα/--SEA,1 例 HKαα/-α4.2 复合 βIVS-2-654/βN,1例-α3.7/αααti-4.2复合βIVS-2-654βN。香港型地贫占-αα3.7缺失型地贫携带者比达到7.93%(18/227)。提示现临床常用的Gαp-PCR将-α3.7/ααααti-4.2及香港型HKαα误诊为静止型地贫的误诊率9.17%。此外,HKαα突变占α-珠蛋白基因突变的1.5%。HKαα复合β地贫较多,占α复合β地贫的5.88%(4/68)。且HKαα/αα基因型的血液学参数结果无明显异常。结论:1.四川地区缺失型α-地贫以-SEA/αα、-α3.7/αα、-α3.7/--SEA为主,非缺失型α-地贫以ααQS/αα为主。β-地贫以βcd17/βN、βcd41-42/βN、βIVS-2-654/βN为主。且β-地贫略多于α-地贫。2.在本研究中,HKαα基因型占-α3.7缺失型地贫基因携带者比例较高,达7.93%。运用目前临床常用的Gap-PCR技术,会被误诊为-α3.7,导致增加孕妇不必要的产前基因诊断,增加流产的风险。特别要注意如果Gap-PCR只得到以αα2和-α3.7阳性片段时可能存在HKαα/αα、HKαα/-α3.7、HKαα/αααanti-4.2、HKαα/αααanti-3.7 的可能。有必要运用巢式PCR联合MLPA进行αααanti-4.2和HKαα基因型鉴定,同时可诊断出-α3.7/αααati-4.2。该策略可降低-α3.7缺失型地贫基因携带者诊断的错误率,明确-α3.7/αααanti-4.2和HKαα基因型,为临床医生提供更准确的遗传咨询及产前诊断。