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【目的】研究大麻素受体CB2抑制剂AM630对钛颗粒诱导下巨噬细胞的影响,为临床治疗人工关节假体无菌性松动提供新的作用靶点。【方法】采用小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞,用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)比色还原法观察AM630对RAW264.7细胞的生长抑制作用。酶联免疫法(ELISA)检测AM630作用于不同浓度的钛颗粒诱导下RAW264.7细胞分泌肿瘤坏死因子α( TNF-α)、白介素1β( IL-1β)细胞因子的量的变化。光镜下观察细胞形态学变化,caspase-3免疫组化法、流式细胞仪(FCM)分析诱导下RAW264.7细胞的凋亡等作用。TRAP染色观察AM630对RAW264.7细胞向破骨细胞转化能力的影响,免疫印迹法(Western blot)检测ERK蛋白水平变化。【结果】大麻素受体CB2选择性抑制剂AM630在0-200nM浓度范围内不影响RAW264.7细胞增殖。小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞易贴壁,增殖速度快。加入钛颗粒后,光镜下可见RAW264.7细胞吞噬钛颗粒现象,并随着钛颗粒浓度增高,细胞增殖生长能力下降。培养上清液中TNF-α细胞因子含量随钛颗粒浓度(0.1mg/ml、0.5mg/ml、1mg/ml)增加而增加,与对照空白组相比p<0.05,具有统计学意义;而IL-1β细胞因子含量在钛颗粒浓度为0.5mg/ml、1mg/ml时与对照空白组有差别。加入AM630(100nM)后,细胞因子含量明显下降。caspase-3免疫组化染色后镜下可见钛颗粒组及AM630组均出现细胞胞浆呈黄色的caspase-3阳性细胞;并可见一些细胞皱缩,核边缘化、固缩或碎裂,甚至无核的胞浆深染的凋亡小体。在流式细胞DNA直方图上,钛颗粒组(0.1mg/ml)出现明显高耸的亚二倍体“凋亡峰”,细胞周期被阻滞在“S”期,其“S”期的比率为0.579±0.0105,明显高于对照组细胞的0.423±0.0079(t=23.74,p<0.01),而其G2/M期细胞明显减少。单纯AM630组亦出现细胞凋亡亚峰,其“S”期的比率为0.436±0.0116,和对照组细胞相似(t=1.88,p=0.1086>0.05)。在RANKL作用下RAW264.7细胞可向破骨细胞转化,可见许多细胞胞浆呈红色的TRAP染色阳性细胞,Western blot法检测ERK磷酸化水平显著增高;而加入AM630组TRAP染色阳性细胞数明显减少,ERK磷酸化水平降低。【结论】(1)钛颗粒能诱导巨噬细胞(RAW264.7细胞)分泌TNF-α、IL-1β等细胞因子,与浓度呈一定的正相关;并引起细胞过度凋亡,抑制细胞增殖;在RANKL作用下巨噬细胞能向破骨细胞转化。(2)大麻素受体CB2选择性抑制剂AM630通过抑制CB2表达,降低钛颗粒诱导下巨噬细胞分泌TNF-α、IL-1β细胞因子;促进细胞凋亡;并可能通过ERK通路抑制巨噬细胞向破骨细胞转化。因此大麻素受体CB2有望成为临床治疗磨损颗粒引起的假体无菌性松动的新靶点。