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目的:1.建立SD大鼠后发性白内障动物模型2.检测SD大鼠后发性白内障形成过程中晶状体发育转录因子和晶状体蛋白的表达3.通过RNA干扰抑制晶状体上皮细胞Foxe3 mRNA的表达,观察抑制效果和对细胞增殖的影响方法:1.对2月龄SD大鼠行晶状体囊外摘除术(ECLE),在术后不同时间点行裂隙灯观察、照相及组织学检查;2.取ECLE术前、术后即刻、3天、14天、1月、3月的晶状体组织,采用半定量RT-PCR和/或免疫荧光法检测α-、β-、γ-晶状体蛋白和转录因子Pax6、Prox1、Foxe3的表达,并对PCR产物进行测序。3.体外转录合成特异针对Foxe3基因的3对短发夹环RNA(F1-3—shRNA),利用脂质体以100nmol/l浓度转染人晶状体上皮细胞系(HLEC-B3),以非特异性shRNA(HK—shRNA)转染、单纯脂质体转染和空白组为对照,通过MTT法筛选抑制效率最高的shRNA。再将其以50nmol/l、100nmol/l、200nmol/l浓度转染HLEC-B3,利用荧光定量PCR、半定量RT-PCR、Western Blot、免疫荧光观察抑制效果,并通过细胞生长曲线和流式细胞仪观察细胞的增殖状态和细胞周期。结果:1.术后即刻,前囊膜下残留晶状体上皮细胞(LEC);术后1天,LEC已增殖迁移至后囊膜中央区;术后3天,后囊中央轻度混浊、皱缩,晶状体囊袋内布满增生的LEC,周边部发生晶状体纤维分化。术后7天,后囊中央混浊继续加重,后囊放射状皱褶明显,周边形成Seomerring环。术后14天,瞳孔区囊膜组织纤维机化,Seomerring环更为明显,其内新生晶状体物质呈半透明;术后1月,新生的晶状体纤维填充满晶状体囊袋,形成类似正常晶状体的赤道部和弓部生发区。术后2、3月,晶状体纤维继续增生,体积逐渐接近正常晶状体。2.半定量RT-PCR检测结果显示在术后αA、αB、βB1、βB2、βA2、γD晶状体蛋白和Pax6、Proxl mRNA的表达逐渐增加,术后2周时的表达量己接近于术前;测序结果与已公布目的基因的同源性均超过99%。Pax6,Proxl,Foxe3在术后各时间点均有荧光表达,表达分布与出生后正常晶状体类似。Pax6主要表达于LEC和新近生成的晶状体纤维。Proxl表达于LEC和晶状体纤维,在生发区LEC和新生晶状体纤维细胞的细胞核内表达水平显著升高。Foxe3仅局限表达于LEC,晶状体纤维中无表达。3.F1-3—shRNA均能有效抑制HLEC-B3的增殖(P=0.000),其中F1—shRNA的抑制效率最高(55.2%)。50 nmol/1、100 nmol/1、200 nmol/1浓度的F1—shRNA均可有效抑制Foxe3表达;以50 nmol/1浓度抑制效率最高,48h后mRNA下调60.93%、39.95%和37.32%,72h后蛋白分别下调61.54%、28.66%和27.84%。细胞增殖明显受到抑制(P=0.000),细胞周期被阻滞于G0/G1期,并出现凋亡峰。结论1.SD大鼠行晶状体囊外摘除术后短期内即会发生明显的PCO,手术成功率高,重复性好。2.大鼠PCO形成过程中有α—、β—和γ—晶状体蛋白家族的动态表达,表明晶状体纤维分化参与PCO的形成。3.大鼠PCO形成过程中有多种晶状体转录因子的表达,参与调控LEC的增殖和晶状体纤维分化。4.晶状体摘除术后LEC的增殖和晶状体纤维分化形成PCO,其发生过程与晶状体的发育有相似之处。4.Foxe3—shRNA在体外可特异性抑制永生化人晶状体上皮细胞Foxe3基因的表达,从而有效抑制细胞增殖,诱导凋亡。