近年来,随着分子生物学技术的发展和应用,用免疫疗法、基因治疗等新方法以及多种疗法联合成为肿瘤治疗领域的研究热点。其中,自杀基因疗法是研究较深入、具有应用前景的肿瘤治疗新措施,全世界已经有多套自杀基因治疗系统正在进行甚至已经完成Ⅰ-Ⅲ期临床试验。现有研究发现,几乎所有自杀基因系统都存在旁杀伤效应,增强旁杀伤效应能降低对高转染率的要求,减少载体及前体药物用量和毒性,增强基因治疗系统对肿瘤杀伤力。因此,增强旁杀伤效应已成为提高肿瘤基因治疗疗效的重要策略。从目前的研究看,产生旁杀伤效应的主要机制有:缝隙连接细胞通讯（GapJunctional Intercelhlar CommunicatiOn,GJIC）介导,细胞凋亡介导和免疫介导等机制。其中,GJIC是产生旁杀伤效应的最主要机制之一。前期研究发现中药活性成分白藜芦醇在对细胞无明显毒性的低浓度条件下,联合HSV-tk/GCV系统能显著地提高GCV对tk⁺、tk^-混合细胞的杀伤率,具有明显增强HSV-tk/GCV系统旁杀伤效应的作用,其增效作用具有协同性。其作用机制很可能是通过增强细胞的GJIC和诱导凋亡、调节细胞周期等来起到增效作用的,也可能是两个机制都起作用。中药是一个天然药物宝库,在诱导癌细胞凋亡、增强肿瘤GJIC或提高患瘤机体免疫功能等方面具有优势或潜力,且毒副作用相对较少,从中寻找自杀基因增效药物并研究其作用机制,建立中西医结合疗法具有可行性和良好的应用前景。研究目的:本课题选择对自杀基因系统有协同增效作用,获得肯定作用的中药活性成分白藜芦醇,探讨其通过GJIC增强自杀基因旁杀伤效应的药理靶点,阐明其增效的机理,为建立肿瘤基因治疗联合中医药疗法,推进肿瘤基因治疗的临床应用和抗癌中药新药开发打下基础。实验方法:本文以体外培养的人肝癌细胞HepG2和大鼠肝癌细胞CBRH7919作为研究对象,首先采用MTT法作出白藜芦醇对肝癌细胞的生长曲线,计算IC50,确定药物浓度及作用时间。划痕标记染料示踪技术（scrape-loading dye transfer assay,SL/DT）、双荧光素传输流式细胞仪检测白藜芦醇对肝癌细胞GJIC功能的影响,Western-blot法检测白藜芦醇对缝隙连接蛋白Cx43和Cx32表达的影响。结果:1中药活性成分白藜芦醇对HepG2细胞的影响药物作用前镜下观察各孔细胞和形态未见明显差异,而药物作用24小时起镜下观察可见50μM组和100μM组的细胞数目明显减少;随着孵育时间的增加,25μM组也明显发生细胞生长抑制现象。至60小时10μM组仍未见明显细胞生长抑制现象,而浓度为25μM以上的各组贴壁细胞逐渐变圆、脱落。用10μM、25μM、50μM、100μM、的白藜芦醇作用于HepG2细胞60h,MTT检测各组存活率分别为90.8±4.0%（p=0.085＞0.05）、73.6±4.8%（p=0.005＜0.01）、40.5±3.9%（p=0.0007＜0.01）、26.7±3.2%（p=0.0004＜0.01）;It50为43μM。可见白藜芦醇对HepG2细胞生长有一定的抑制效应,且作用呈时间和剂量依赖关系。说明白藜芦醇对HepG2有细胞毒作用。2.SL/DT法对肝癌细胞间染料传输功能进行检测,结果显示:细胞经过白藜芦醇处理后,细胞间染料传输功能获得增强;流式细胞仪检测白藜芦醇对双荧光素传输的影响,结果显示:白藜芦醇等处理组红绿荧光素双阳性染色（双阳性染色越多说明GJ功能越好）的比例比对照组明显增加,而且有浓度依赖性。表明白藜芦醇能提高HepG2细胞及CBRH7919细胞的GJIC功能。3.Western blot检测,用国产多克隆Cx一抗和进口单克隆Cx一抗的实验均显示:白藜芦醇等能明显提高人肝癌细胞HepG2和大鼠肝癌细胞CBRH7919的Cx32的表达,且有时间、浓度依赖性,氧化剂H₂O₂能抑制白藜芦醇此作用;但白藜芦醇对HepG2及大鼠肝癌细胞CBRH7919的Cx43表达影响24h不明显,48h能明显提高Cx43表达。有浓度依赖性。结论:本文在前期实验中药活性成分白藜芦醇对HSV-TK/GCV自杀基因疗法的增效作用,能有效提高自杀基因对肝癌细胞的抑制率,提高旁观者效应,而且有协同增效作用的基础上对其机制进行进一步研究,结果表明,白藜芦醇能提高肝癌细胞Cx表达,增强GJIC功能,可能是其增强tk基因旁观者效应的机制之一。