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目的: 研究三七总皂苷(Panax Notoginseng Saponins,PNS)对异丙肾上腺素(Isoproterenol,ISO)诱导的小鼠心肌纤维化的干预作用及其microRNA调控机制,以期为其临床应用与推广提供科学的实验及理论依据。 方法: (1)造模方法:本实验使用C57BL/6J小鼠为受试对象,采用腹腔注射ISO的方法进行造模。(2)分组方法:将动物分为正常组(Vehicle control),模型组(ISO),PNS低剂量治疗组(ISO+PNSL)和PNS高剂量治疗组(ISO+PNSH)。(3)病理学检测:苏木素伊红(H&E)染色,Massons trichrome染色和天狼星红(Sirius redstaining)染色观察小鼠心肌病理形态改变及胶原沉积。(4)免疫组织化学检测:检测小鼠心肌α-SMA(α-smooth muscle actin),TGFβ1(Transforming growth factorβ1),Smad3的免疫阳性。(5)分子生物学检测:Real-time PCR(Polymerase chainreaction)检测心肌纤维化相关的microRNA表达水平和基因的mRNA表达水平。 结果: (1)病理学手段观察心肌形态学及胶原沉积:H&E(Hematoxylin& Eosin)染色显示,与正常组相比,模型组小鼠心肌纤维排列紊乱,有明显心肌细胞坏死,炎性细胞浸润和肉芽组织形成;与模型组相比,PNS低剂量治疗组心肌损伤情况有明显改善,偶见心肌损伤,PNS高剂量治疗组心肌形态大致正常,未见明显损伤。Massons trichrome染色及染色阳性面积比例计算结果显示,与正常组(10±0.67)%相比,模型组心肌胶原沉积显著增加(52.53±1.38)%(p<0.01);与模型组相比,PNS低剂量治疗组心肌胶原纤维显著减少(19.77±0.54)%(p<0.01),PNS高剂量治疗组心肌胶原纤维显著减少(13.88%±0.65)(p<0.01)。天狼猩红染色提示相似结果。(2)免疫组织化学检测α-SMA,TGFβ1,Smad3的免疫阳性:与正常组相比,模型组小鼠心肌组织损伤部位α-SMA,TGFβ1,Smad3阳性反应率显著增加;与模型组相比,PNS低剂量治疗组和PNS高剂量治疗组心肌组织α-SMA,TGFβ1,Smad3免疫阳性显著下降。(3)分子生物学手段检测心肌组织microRNA及相关基因mRNA表达:1.与正常组相比,模型组小鼠心肌组织胶原及纤维化相关基因Col1a1(Collagen typeⅠ,alpha1),Col1a2(Collagen typeⅠ,alpha2), Col3a1(Collagen typeⅢ,alpha1), Col5a1(CollagentypeⅤ,alpha1), Col5a2(Collagen typeⅤ, alpha2), Fbn1(Fibronectin1), Postn(Periostin),Timp1(Tissue inhibitor ofmetalloproteinaise1)表达水平显著上调(p<0.05),PNS低剂量组小鼠心肌组织上述基因除Col5a2外表达均显著下调(p<0.05),PNS高剂量治疗组上述基因表达均显著下调(p<0.05)。2.与正常组相比,模型组小鼠心肌组织miR-29c-5p和miR-29b-3p的表达均显著下调(p<0.05);与模型组相比,PNS低剂量和高剂量治疗组小鼠心肌组织miR-29c-5p表达水平显著上调。 结论: (1)三七总皂苷具有抑制心肌损伤及纤维化的作用,且这种效应具有一定的剂量依赖性。(2)三七总皂苷抑制心肌纤维化的效应可能部分与其上调miR-29c-5p的表达,进而下调胶原相关基因,如Col1a1,Col1a2,Col3a1,Col5a1,Col5a2,Fbn1的表达水平相关。(3)三七总皂苷抑制心肌纤维化的效应可能部分与其上调miR-29c-5p的表达,进而抑制TGFβ1信号通路介导的纤维化效应有关。