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目的：目前，全世界每年大约有130万～180万人死于肺癌，占癌症死亡人数的1/6，肺癌也是我国人群死亡率上升最快的癌症，居恶性肿瘤之首。中医学素有“肺肾相关、金水相生、肺肾相生”的理论，表明肺肾两脏密切关联。肾藏精主生殖，生殖内分泌系统属于中医藏象学说“肾”的范畴，研究表明性激素受体在人肺癌组织和小鼠Lewis肺癌模型中均有不同程度的表达，动物实验显示性激素在小鼠Lewis肺癌模型不同处理组（去势、非去势）间的含量不同。多项临床研究显示性激素水平下降导致肾虚证的发生，肺癌患者存在性激素水平失衡及性激素受体过表达的现象。由于多因素、多环节、多途径参与肺癌的发生发展，加之肿瘤本身以及患者个体之间的异质性，即使近年来分子靶向治疗和个体化治疗等效果也不尽如人意。单一靶点的治疗往往阻断不够完全，因此效果差;同时因为细胞内相关信号通路的交互作用，阻断其中一条通路又会导致其它通路的回馈性启动，进而诱导继发性耐药，如针对EGFR的靶向药物吉非替尼等。完全对抗的结果必然会引起新的不平衡和其他靶点和信号通路的异常激活，基于此，选取良好表达性激素受体的肺腺癌A549细胞系，采用小RNA干扰技术（small interfering RNA，siRNA）和不同浓度性激素干预实验，并从与肺癌发展紧密关联的EGFR信号通路探讨性激素及其受体作用于肺癌的机制，为治疗肺癌新的潜在靶点的探索和丰富中医“肺肾相关”的学说及从肾论治肺癌提供客观依据。 方法：1.设计并合成针对性激素受体的siRNA和与性激素受体无同源性的阴性对照siRNA（negative control siRNA，NCsiRNA）转染A549细胞48h，siRNA转染实验分为转染组（[雄激素受体转染组(androgen receptor siRNA transfection，AR-siRNA)]、[雌激素受体α转染组（estrogen receptorαsiRNA transfection，ERα-siRNA）]、[雌激素受体β转染组(estrogen receptorβsiRNA transfection，ERβ-siRNA)])、阴性对照siRNA转染组（negative control siRNA transfection，NC）、Lipofectamine2000转染组(Lipo)和空白对照组(Control);稀释不同浓度（0μmol/L、10μmol/L、50μmol/L、100μmol/L）的睾酮(testosterone，T)和雌二醇(estradiol，E2)干预A549细胞48h。 2.Western blot实验分析siRNA转染和性激素干预后A549细胞中AR、ERα、ERβ、EGFR、PI3K、AKT蛋白的表达。 3.RT-PCR(Real-time PCR)实验检测siRNA转染和性激素干预后A549细胞中AR、ERα、ERβ、EGFR、PI3K、AKT的mRNA表达。 4.CCK-8(Cell Counting Kit-8)实验检测siRNA转染和性激素干预后A549细胞的活性。 5.流式细胞分析实验检测siRNA转染和性激素干预后A549细胞的凋亡。 6.划痕实验分析siRNA转染和性激素干预后A549细胞的迁移能力。 7.Transwell实验分析siRNA转染和性激素干预后A549细胞的侵袭能力。 结果：1.siRNA转染实验中，siRNA特异性敲低AR、ERα、ERβ表达后，Western blot和Real-time PCR实验表明，EGFR、PI3K、AKT的蛋白和mRNA表达水平均被抑制，CCK-8和流式细胞分析实验表明A549细胞的活性降低、凋亡增加，划痕实验和Transwell实验表明A549细胞的迁移和侵袭能力降低。 2.性激素干预实验中，10μmol/L T/E2干预A549细胞后，AR、ERα、ERβ的表达升高，EGFR、PI3K、AKT的表达也升高，A549细胞的活性增强、凋亡减少、迁移和侵袭能力增强;50μmol/L T/E2干预A549细胞后，AR、ERα、ERβ的表达降低，EGFR、PI3K、AKT的表达也降低，A549细胞的活性降低、凋亡增加、迁移和侵袭能力降低;100μmol/L T/E2干预A549细胞后，与50μmol/L T/E2干预组相比，AR、ERα、ERβ的表达再次升高，A549细胞的活性增强，凋亡减少、迁移和侵袭能力增强。 结论：通过siRNA沉默AR、ERα、ERβ和不同浓度性激素干预肺腺癌A549细胞，结果提示适当（中等水平）水平的性激素及其受体抑制A549细胞增殖，过低或过高水平的性激素及其受体的异常表达可通过EGFR/PI3K/AKT信号通路促进A549细胞的增殖、迁移和侵袭。性激素通过其受体AR、ERα、ERβ和EGFR/PI3K/AKT信号通路调控A549细胞的生长、迁移和侵袭，可能是“肾虚”影响肺癌的作用途径之一，为肾虚内环境影响肺癌的机制提供了依据。AR、ERα、ERβ或可成为肺癌评估预后的生物标记物及治疗的新靶点，生殖内分泌治疗有望成为肺癌治疗的新方法，从肾论治肺癌的中药组方调理肺癌患者体内性激素失衡的内环境有望在肺癌的联合治疗中发挥重要作用。