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为了进一步明确菱角壳中抗肿瘤的活性成分,并阐明其作用机制。采用分级萃取,硅胶、Sephadex LH-20凝胶柱层析及制备液相分离菱角壳多酚,对菱角壳抑肿瘤活性成分进行跟踪筛选;对分离到的单体化合物经HPLC-MS、NMR技术进行结构鉴定,并对其体外抗肿瘤机理开展研究。主要实验结果如下:1.从菱角壳乙醇提取物中分离得到1,2,6-三没食子酰-β-D-葡萄糖、1,2,3,6-四没食子酰-β-D-葡萄糖和1,2,3,4,6-五没食子酰务D-葡萄糖,含量分别为38mg/g、120mg/g、8mg/g。1,2,3,4,6-五没食子酰-β-D-葡萄糖对人胃癌SGC7901和人肝癌HepG2细胞增殖具有明显的抑制作用,其作用SGC7901细胞24h的IC50为40.85μg/mL,效果优于阳性药物5-FU;1,2,3,6-四没食子酰-β-D-葡萄糖对SGC7901细胞的抑制效果较好;1,2,6-三没食子酰-β-D-葡萄糖对HepG2细胞的抑制效果较好。2.1,2,3,6-四没食子酰-β-D-葡萄糖可影响SGC7901周期,200μg/mL的剂量作用48h可使细胞停滞在G1期,也可诱导SGC7901发生凋亡,凋亡率为28.39%,细胞内钙离子浓度增加,线粒体膜电位降低、通透性增加。转录组测序分析表明,1,2,3,6-四没食子酰-β-D-葡萄糖主要通过P53信号通路诱导SGC7901发生凋亡。RT-qpCR和Western blot结果表明,1,2,3,6-四没食子酰-β-D-葡萄糖可以通过上调P21、PUMA、PERP、IGF-BP3,下调CyclinD基因mRNA的表达,增加 P53、Bax、Cytochrome c、Caspase-3、Caspase-9 蛋白表达,减少 Bcl-2蛋白表达来诱导SGC7901凋亡。3.1,2,3,4,6-五没食子酰-β-D-葡萄糖可影响肿瘤细胞的细胞周期,12.5-50μg/mL 浓度使 HepG2 和 SGC7901 停留在 S 期,100 和 200μg/mL 浓度使HepG2阻滞于G1期,SGC7901阻滞于G2期,也可诱导HepG2和SGC7901发生凋亡,在药物浓度200μg/mL时凋亡率分别为51.02%、48.98%。1,2,3,4,6-五没食子酰-β-D-葡萄糖可使两株肿瘤细胞线粒体膜电位降低,细胞内钙离子浓度增加。RT-qPCR和Western blot结果表明,1,2,3,4,6-五没食子酰-β-D-葡萄糖可以通过上调PERP、IGF-BP3基因mRNA的表达,增加P53、P21、PUMA、Bax、Cytochrome c、Caspase-3、Caspase-9 蛋白表达,减少 Bcl-2 蛋白表达来诱导SGC7901、HepG2凋亡。