论文部分内容阅读
背景肾素-血管紧张素系统(renin-angiotensin system,RAS)在高血压病发病中发挥重要作用。下丘脑室旁核(hypothalamic paraventricular nucleus,PVN)在维持心血管活动中起着关键作用,可直接支配交感神经节前神经元,参与外周交感神经活动的调节,与高血压的发生发展密切相关。Alamandine是一类新发现的RAS家族成员,结构与血管紧张素1-7类似,具有血管活性,通过与Mas相关性G蛋白耦联受体D(G-Protein–Coupled Receptor,member D(Mrg D))结合,在外周血管、心肌、中枢神经系统发挥作用。本研究采用Wistar-Kyoto(WKY)大鼠和自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHRs),PVN微量注射不同剂量的alamandine,观察其是否参与调控高血压大鼠血压和交感神经活动,并探讨其机制。目的1.探讨alamandine在室旁核能否调控交感神经活动和动脉血压;2.探讨alamandine是否通过环磷酸腺苷(cyclic AMP,c AMP)-蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)信号通路参与了调控交感活动和动脉血压。方法1.实验在周龄12周的血压正常的WKY大鼠和SHR上进行。大鼠自由摄食和饮水,并保持12小时昼夜节律,大鼠麻醉后采用立体定位仪进行双侧PVN定位和微量注射药物,利用Powerlab生物信号采集系统在体记录肾交感神经活动(renal sympathetic nerve activity,RSNA)和平均动脉血压(mean arterial pressure,MAP)。2.WKY大鼠和SHR各30只,分别分为5组,每组6只,分别在PVN微量注射生理盐水(saline)、alamandine(4,40,400pmol)、AngⅡ(40pmol),观察大鼠交感神经活动和平均动脉压的变化。3.WKY大鼠和SHR各24只,分别分为4组,每组6只,分别在PVN微量注射Mrg D拮抗剂D-Pro7-Ang-(1-7)(50pmol)、c AMP(1nmol)、腺苷酸环化酶(adenylate cyclase AC)抑制剂SQ22536(2nmol)、PKA抑制剂Rp-c AMP(1nmol),观察交感神经活动和平均动脉压的变化。4.WKY大鼠和SHR各24只,分别分为4组,每组6只,给予D-Pro7-Ang-(1-7)(50pmol)预处理5分钟,c AMP(1nmol)、SQ22536(2nmol)、Rp-c AMP(1nmol)分别预处理8分钟后再注射alamandine(40pmol),观察其对alamandine引起的RSNA和MAP效应的影响。结果1.Alamandine剂量依赖性增加WKY大鼠和SHR的MAP和RSNA,其中中剂量(40pmol)和高剂量(400pmol)alanmandine能显著升高WKY大鼠和SHR的RSNA和MAP,在SHR上这一现象更为明显。但是低剂量alamandine(4pmol)对大鼠MAP和RSNA没有显著性作用。AngⅡ均使两种大鼠的RSNA和MAP升高,但在SHR上这一效应更为明显。比较alamandine和AngⅡ对同一种属大鼠的MAP和RSNA的影响,两者无统计学差异。2.D-Pro7-Ang-(1-7)降低SHR的MAP和RSNA,但是对于WKY大鼠无影响。PVN预处理给予D-Pro7-Ang-(1-7),阻断alamandine升高WKY大鼠和SHR MAP和RSNA的效应。3.c AMP能增加WKY大鼠和SHR的MAP和RSNA,在SHR上这一效应更为明显。PVN预处理c AMP,增强alamandine升高MAP和增强RSNA的效应。AC抑制剂SQ22536,降低SHR的MAP和RSNA,但对于WKY大鼠无明显作用。SQ22536能够阻断alamandine对于WKY大鼠和SHR MAP和RSAN影响的效应。4.PKA拮抗剂Rp-cAMP降低SHR的MAP和RSNA,但对于WKY大鼠无效,PVN预处理Rp-c AMP能阻断alamandine对于WKY大鼠和SHR MAP和RSAN影响的效应。结论1.WKY大鼠和SHR双侧PVN微量注射Alamandine升高MAP和RSNA,存在剂量-效应关系,SHR较WKY大鼠升高MAP和RSNA更为明显。2.Alamandine与Mrg D结合,通过c AMP-PKA通路介导了alamandine升高MAP和RSNA效应。