【摘 要】
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目的:通过构建H1N1体外感染A549细胞流感模型,探讨宣白承气汤加味对H1N1感染A549细胞不同时间点病毒载量影响及RIG-I、MAVS、IFN-β的表达情况,阐明宣白承气汤加味对H1N1感染A549细胞的抗流感病毒机制。材料与方法:首先进行H1N1体外鸡胚增毒并检测H1N1半数组织感染量(TCID50),然后测定供试药品宣白承气汤加味和磷酸奥司他韦颗粒的最佳用药浓度(TC50),用药物干预细
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目的:通过构建H1N1体外感染A549细胞流感模型,探讨宣白承气汤加味对H1N1感染A549细胞不同时间点病毒载量影响及RIG-I、MAVS、IFN-β的表达情况,阐明宣白承气汤加味对H1N1感染A549细胞的抗流感病毒机制。材料与方法:首先进行H1N1体外鸡胚增毒并检测H1N1半数组织感染量(TCID50),然后测定供试药品宣白承气汤加味和磷酸奥司他韦颗粒的最佳用药浓度(TC50),用药物干预细胞模型后计算病毒抑制率,并通过Probit回归分析得出药物半数有效浓度(IC50),继而算出药物疗效评价指数TI。最后将A549接种在4孔培养小室中,随机分为正常组、模型组、中药组、西药组,除正常组外其余三组用H1N1感染A549细胞,病毒吸附1h后,中药组更换宣白承气汤加味最佳浓度药液,西药组更换磷酸奥司他韦最佳浓度药液,正常组与模型组更换维持液,在药物干预H1N1体外感染A549细胞后第8h、24h、48h、72h四个时间点取出对应组培养小室用免疫荧光技术测定细胞病毒载量以及RIG-I、MAVS蛋白的荧光表达,用荧光显微镜拍摄图片并进行荧光强度数据分析,探讨其变化差异,用ELISA法测定不同时间点细胞上清液中IFN-β的表达水平。结果:1.H1N1最佳血凝滴度及半数组织感染量:鸡胚扩增后病毒测定最佳血凝滴度(1:1024),H1N1病毒TCID50为10-3。2.药物治疗指数:宣白承气汤加味TI=6.82,磷酸奥司他韦颗粒TI=9.10。3.H1N1的病毒载量:24h模型组表达强度最高,中药组少于模型组存在差异性(P<0.05),西药组与模型组相比具有显著差异(P<0.01),中药组少于模型组存在差异(P<0.05)。48h、72h时,中药组与西药组与模型组相比都存在差异(P<0.01)。中药组48h有效率相比24h显著提高。4.RIG-I蛋白表达荧光强度:8h时模型组蛋白强度显著升高(P<0.001),药物组均小于模型组;24h时西药组RIG-I表达明显降低(P<0.0001);48h、72h时药物组与模型组之间均存在差异(P<0.05);模型组在三个时间点上,24h蛋白表达强度最高。5.MAVS蛋白表达荧光强度:在8h时MAVS正常组少量表达,模型组与药物组表达均高于正常组,药物组与模型组相比存在差异性(P<0.01);24h时模型组继续高度表达,药物组表达强度低于模型组(P<0.01);48h、72h时药物组MAVS表达强度低于模型组,存在显著差异(P<0.01);模型组在24h时MAVS荧光强度达到高峰。6.细胞上清液IFN-β含量:与正常组相比模型组、中药组、西药组IFN-β的表达含量均有增多(P<0.05),药物组在24h、48h、72h时IFN-β的表达大于模型组。结论:1.宣白承气汤加味可降低A549细胞感染后不同时间点的H1N1病毒载量,可能具有抑制流感病毒复制的作用。2.宣白承气汤加味可能通过抑制RIG-I蛋白的过度激活,下调MAVS的表达,释放IFN-β发挥抗流感病毒的作用。
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