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目的:建立一种符合中医血虚便秘证候的动物模型,并对模型动物结肠黏膜水通道蛋白(AQPs)的表达与血虚便秘形成的相关性进行探讨,为血虚便秘的相关研究提供参考。方法:1.血虚便秘大鼠模型的建立与评价64只SPF级SD大鼠,随机分为正常组、血虚组、便秘组和血虚便秘组,共4组,每组16只。血虚组皮下注射乙酰苯肼(APH)42 mg/kg+腹腔注射环磷酰胺(CPA)28mg/kg,便秘组灌胃复方地芬诺酯13.5 mg/kg,血虚便秘组皮下注射乙酰苯肼42 mg/kg+腹腔注射环磷酰胺28 mg/kg+灌胃复方地芬诺酯13.5 mg/kg,连续28 d。造模期间观察大鼠一般状态和体重变化,造模第28 d和造模结束第7 d,各组动物眼眶静脉丛采血检测白细胞计数(WBC)、红细胞计数(RBC)、血红蛋白(HGB)和红细胞压积(HCT),同时记录大鼠首粒黑便排出时间(TFBF)、粪便含水量(FWC)和结肠含水量(CWC);取结肠组织进行HE和AB-PAS染色,显微镜下观察结肠组织形态及结肠黏液分泌情况。2.血虚便秘模型大鼠结肠AQPs的差异化表达取血虚便秘模型大鼠结肠黏膜组织,固定,包埋,切片,免疫组化(IHC)染色,显微镜下观察,用图像处理软件对大鼠结肠黏膜水通道蛋白(AQPs)的表达进行定位分析,并计算阳性表达参数的平均光密度值(MOD),对AQPs的表达进行半定量分析。结果:1.正常组大鼠活动正常,反应灵敏,皮毛密而有光泽;血虚组大鼠蜷缩,萎靡,皮毛膨松、易掉,耳、鼻、唇、尾苍白;便秘组大鼠皮毛光泽暗淡,排便减少;血虚便秘组大鼠蜷缩,萎靡,毛枯疏、光泽暗淡,耳、鼻、唇、尾苍白,排便减少,粪便干结、黏连。血虚组、便秘组及血虚便秘组随造模时间延长,均出现体重增长缓慢的情况。血虚组大鼠WBC、RBC、HGB和HCT均显著降低(P<0.05或P<0.01),粪便质软,TFBF、FWC和CWC均无明显变化。结肠组织形态学观察显示,血虚组大鼠结肠组织形态及黏液分泌未见明显异常改变。便秘组大鼠粪便质硬,TFBF显著延长(P<0.01)、FWC显著下降(P<0.01),但WBC、RBC、HGB和HCT无显著变化。结肠组织形态学观察显示,便秘组大鼠结肠肠管呈结节状,结肠带变薄,黏膜层上皮细胞和杯状细胞出现不同程度萎缩,黏膜表面黏液覆盖减少。血虚便秘组大鼠粪便质硬,TFBF显著延长(P<0.01)、FWC显著下降(P<0.01),WBC、RBC和HCT均显著降低(P<0.05或P<0.01)。结肠组织形态学观察显示,血虚便秘组大鼠结肠肠管呈结节状,结肠带变薄,黏膜层上皮细胞和杯状细胞出现不同程度萎缩,黏膜表面黏液覆盖减少。2.免疫组化检测结果显示,血虚便秘组大鼠结肠粘膜AQP1、AQP2、AQP3、AQP4、AQP5、AQP8、AQP9表达均明显增强(P<0.01)。其中吸收细胞表达的主要是AQP1、AQP3、AQP4;杯状细胞表达的主要是AQP3和AQP9。结论:1.乙酰苯肼、环磷酰胺联合复方地芬诺酯复合因素造模建立的血虚便秘大鼠模型基本能体现中医血虚便秘的证候特点,造模方法简便、易行,可作为血虚便秘研究的动物模型。2.血虚便秘模型大鼠结肠AQP1、AQP2、AQP3、AQP4、AQP5、AQP8、AQP9均出现差异化表达,可能是便秘形成的相关分子机制,该模型结肠AQPs的表达可作为血虚便秘实验研究的观察指标之一。