流产胎牛体内新孢子虫的鉴定及其生活史的初步研究

来源 :中国农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:woshiwangxincheng
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本研究在前期血清学调查的基础上,对新孢子虫血清抗体阳性母牛的流产胎牛进行组织病理学检查,结果发现,组织存在不同程度的病变,病变与文献报道的新孢子虫病病变一致,且在胎牛脑组织中观察到包囊样结构,通过形态学观察和免疫组织化学研究证实其为新孢子虫包囊。利用文献报道的新孢子虫特异性基因Nc-5的引物Np6和Np21,对流产胎牛脑组织提取的DNA进行PCR扩增,得到约328bp的目的片段,测序结果表明,此片段序列与已发表的新孢子虫Nc-1株序列同源性为98%。从而确认了新孢子虫病原在国内牛场中的存在,并且是引起牛流产的重要病原。 本研究观察了新孢子虫标准株Nc-1在Vero细胞中的生长发育过程。通过在不同的时间点对接种了新孢子虫的Vero细胞进行观察、取样、固定和染色,研究虫体在Vero细胞中吸附、侵入、增殖和释放的过程。结果显示,在接种后1h只有极少量速殖子侵入细胞,接种后3-6h为虫体侵入细胞的高峰,侵入细胞后的虫体以二分裂方式增殖形成裂殖体,完成一次分裂大约需要8-12h,接种72h时是虫体的释放高峰。释放的新一代速殖子重新侵入新的细胞进行新一轮增殖。 选用BALB/c小鼠做为实验动物模型研究新孢子虫标准株Nc-1在其体内的生长发育过程。对两组小鼠腹腔分别接种8×10<6>个/只和5×10<5>个/只新孢子虫后,观察临床症状并定时宰杀,取心、肝、肺、脑和后肢肌肉等进行组织病理学、免疫组织化学和PCR检测。结果发现两个感染剂量分别引起BALB/c小鼠的急性和亚急性感染,病理变化主要表现为各器官组织的广泛性出血,非化脓性脑炎和肝细胞空泡变性。最早在接种后第16d观察到脑组织内包囊,在其它组织中未观察到包囊结构。PCR检测结果显示,最早于接种后12h检测到肺脏和心脏组织内的新孢子虫特异性基因Nc-5,脑内最早于第8d检测到。接种25d后在肝脏、肺脏和脑内仍能检测到新孢子虫基因,结合病理变化的观察结果,可以发现虫体对肝脏、肺脏和脑组织有一定的组织亲嗜性。本研究还发现雄性小鼠对新孢子虫更为敏感。
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