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通过对载体的选取,以煤基活性炭和椰壳活性炭作为研究对象,将煤基活性炭与椰壳活性炭表面进行硝酸的可控氧化反应、硅烷偶联剂(3-氨丙基-三甲氧基硅烷(APTMS))反应后,再与戊二醛交联,成功共价固载了葡萄糖氧化酶(GOx/GOD)。其中葡萄糖氧化酶的固载量分别为74.75mgGOx/g载体、36.85mgGOx/g载体。固载酶的最佳活性温度均为为38℃,最佳活性pH均为6.0,但是固载酶与游离酶相比,固载酶的温度、pH稳定性明显提高。同时游离酶的米氏常数Km为0.219mol/L;椰壳活性炭固载酶的米氏常数Km为0.393mol/L;煤基活性炭固载酶的米氏常数Km为1.321mol/L,这就表明在活性炭上共价固载GOx后,酶与底物的亲和力没有显著降低。其中煤基活性炭的酶的固载量高,并且温度、pH稳定性明显好于椰壳活性炭,因此实验选取以煤基活性炭为载体固载葡萄糖氧化酶。FT-IR表征结果证明氧化反应成功,并且共价键连接成功。将煤基活性炭成型为圆柱状,其中直径为3mm,长度为2.2cm,碘吸附值800mg/g,比表面积1000m2/g,灰分≤4%。以此棒状的煤基活性炭作为新型的工作电极,在工作电极上进行可控氧化及硅烷偶联剂(APTMS)反应后,与戊二醛交联,固载GOx,以Pt为对电极,饱和甘汞电极作为参比电极。电解液为0.1mmol/L羟基二茂铁PBS(pH=7.0)溶液,通过CV(循环伏安法)测试测得曲线,CV曲线表明该实验得到一对氧化还原峰,并且随着扫速的增加,电位差也逐渐增大,这就表明GOD-ACAGM电极能够对该酶促反应有很好的响应。FT-IR表征结果证明氧化反应成功,并且共价键连接成功,N2物理吸附-脱附对孔径表征结果表明GOx成功固载在活性炭上以此棒状的煤基活性炭作为新型的工作电极,以Pt为对电极,饱和甘汞电极作为参比电极,在工作电极表面电沉积纳米钴,再用金取代形成纳米金,葡萄糖氧化酶经过简单的冰浴搅拌稳定的固载在该电极上。SEM和EDS表征结果证明纳米钻和纳米金均成功在工作电极表面形成,通过GOx标准曲线测得该电极的葡萄糖氧化酶的固载量为82mg GOx/g载体。CV表征结果证明经过纳米金修饰并固载酶的工作电极对葡萄糖有明显的电流响应,计时电流法的表征结果表明该电极在葡萄糖溶液浓度为2.5-20.31mmol/L范围内成线性关系,并且对尿酸、抗坏血酸抗干扰能力强,葡萄糖氧化酶对葡萄糖专一性强。该电极在一个月后对葡萄糖依然有90%以上的电流响应,表明其稳定性能好。