论文部分内容阅读
实验目的:中重度的机械创伤（MT）可以引起心肌细胞凋亡从而造成心脏功能降低,很多研究表明MT可以导致机体强烈的氧化应激反应和大量细胞炎性因子的释放。其中肿瘤坏死因子（TNF-α）的过量产生是引起心肌细胞凋亡的最主要的原因。白杨素是一种天然存在的黄酮类化合物,主要存在于蜂胶、西番莲属植物和水果中。一些研究表明白杨素具有抗氧化、抗炎等多种生物学活性。本研究目的是观察白杨素能否能够改善MT导致的继发性心脏损伤,并从体内和体外实验探讨其可能的作用机制。实验方法:用MTT法测定了不同白杨素浓度对正常细胞的作用和在TNF-α诱导下对细胞的保护作用,并确定了最合适的药物浓度。通过右颈总动脉插管实验,用BL-420生物信号分析系统记录大鼠左心室收缩压（LVSP）、左心室舒张期末压（LVEDP）、平均动脉压（MAP）左心室最大上升速率(+dP/dTmax)、左心室最大下降速率(-dP/dTmax)等指标。制备心肌组织冰冻切片,用TUNEL染色,在荧光显微镜下拍照并计算心肌组织的凋亡情况。用ELISA法检测了体内和体外实验中的TNF-α的含量。用DCFH-DA法检测单核细胞和心肌细胞内活性氧的含量,DCFH-DA染料是一种非极性化合物可以进入细胞内,细胞内的氧化物可以使DCFH-DA变为高荧光化合物DCF。用激光共聚焦发测定心肌细胞内钙的荧光强度。实验结果:1.用200转创伤模型可以造成大鼠心功能降低与假创伤组相比,创伤200转大鼠心功能各指标LVDP、MAP、+dP/dTmax、-dP/dTmax均显著降低。2.确定了体外实验白杨素最合适的药物浓度与对照组相比,分别用20uM、40uM或80uM白杨素药物浓度孵育正常的心肌细胞,细胞存活率呈剂量依赖性地降低,而用10 uM的药物浓度孵育,细胞存活率没有显著变化。用TNF-α诱导细胞炎症反应引起细胞存活率显著降低,与TNF-α组相比,事先孵育白杨素组的细胞存活率显著升高。3.白杨素可以改善创伤后大鼠心脏损伤与假创伤组相比,心功能各指标LVDP、MAP、+dP/dTmax、-dP/dTmax均明显下降,而白杨素药物干预组心功能各指标均明显升高。4.白杨素可以减少创伤后大鼠心肌组织的凋亡与假创伤组相比,创伤组心肌细胞凋亡指数明显升高。与创伤组相比,白杨素药物干预组心肌细胞凋亡指数显著降低。5.白杨素可以降低创伤血浆中和LPS诱导的TNF-α的含量与假创伤组比,创伤血浆组TNF-α的含量明显上升。与创伤组相比,创伤给药组血浆中TNF-α的含量明显下降。与对照组相比,LPS组TNF-α的含量显著升高。与LPS组相比,创伤给药组TNF-α的含量明显下降。6.白杨素可以降低LPS诱导单核细胞和TNF-α介导心肌细胞活性氧的水平与对照组相比,用LPS诱导细胞炎症反应单核细胞内活性氧水平显著升高。与LPS组相比,用LPS孵育前给予白杨素细胞内活性氧水平显著下降。与对照组相比,心肌细胞TNF-α组活性氧水平显著上升。与TNF-α组相比,用TNF-α孵育前给予白杨素细胞内活性氧水平显著下降。7.白杨素可以降低创伤血浆引起的心肌细胞内钙超载与正常组相比,创伤血浆组Ca2+的荧光强度明显上升。与创伤血浆组相比,创伤给药组Ca2+荧光强度明显减弱结论:以上研究结果表明白杨素通过减轻MT导致的机体TNF-α和活性氧的大量产生,减少心肌细胞内的氧化应激损伤、降低心肌细胞钙超载,从而缓解MT造成的心肌细胞凋亡和心功能损伤。