囊虫病是一种常见的寄生虫病,主要在拉美、非洲、亚洲流行,严重危害经济和人类健康。由于该病是人畜共患病,猪是中间宿主,研发有效的疫苗是解决猪囊尾蚴病的重要途径。 有关猪囊虫病疫苗的研制有许多方法,包括虫体来源的天然抗原或重组抗原,蛋白亚单位疫苗,以及核酸疫苗。在研究寄生虫疫苗时,保护性抗原是最重要的因素。本研究选择了三个保护性抗原表位KETc1,KETc12和GK-t(简称为n1,n2,n3)用于设计抗囊虫病疫苗。 许多研究证明乙肝病毒核心蛋白(HBc)可作为载体携带外源表位。HBc颗粒能接受外源多肽表位的插入,并在原核和真核表达系统中均能保持正确的折叠和自我装配能力。它不仅能强烈诱导B细胞、辅助性T细胞及细胞毒T淋巴细胞的免疫反应,且能使插入的多肽表位发挥其免疫特性。 由于以上知识,我们构建了以HBc为载体的重组融合表达质粒pET28a-△c-3n,编码截短的HBc(1-149位),在HBc的刺突部位第78-79位之间插入表位n1和n2,在149位之后加上表位n3。SDS-PAGE证明IPTG诱导后,在大肠杆菌中高效表达目的蛋白,命名为抗猪囊虫病疫苗Ac-3n。用割胶法纯化融合蛋白,电泳显示为单一条带。在非完全变性条件下,研究融合蛋白的电泳行为,结果表明Ac-3n蛋白能形成多聚物。电镜证实了该融合蛋白能自发聚合成颗粒。 将纯化的Ac-3n疫苗免疫小鼠,ELISA法测定其体液免疫效果。结果表明在免疫鼠中诱导出了高滴度特异性抗体,且IgG1和IgG2a同时升高,显示该疫苗诱导的免疫反应是Th1和Th2混合类型。 用猪囊尾蚴的不同组织与小鼠免疫血清进行western blot试验以检验抗体的特异性,结果有三条带,推测三个表位可能诱导出了三种不同的抗体。 进行dot ELISA试验以研究所选表位的保护作用。结果发现患囊虫病的猪和人的血清中均没有抗△c-3n蛋白的抗体,这从反面验证了我们所选的表位具有保护作用。用感染性的绦虫卵攻击免疫小鼠,测得其相对保护率为89%。