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红车轴草Trifolium pratense L．为豆科( Leguminosae) 车轴草属( Trifolium L．)多年生草本植物，主要有效成分为异黄酮类化合物，红车轴草中的异黄酮因具有植物雌激素样作用和抗癌作用等多种生物学功能而格外受人关注，红车轴草的提取物是国际上公认的治疗更年期综合证疗效确切的植物药。目前在国外红车轴草已被制成各种剂型，对红车轴草的研究越来越多，也越来越深入。本实验以红车轴草药材的提取物为研究对象，采用HPLC方法建立了红车轴草提取物的指纹图谱，比较了红车轴草鲜、干药材提取物的HPLC指纹图谱的异同点,建立其质量控制方法。这将有利于红车轴草鲜药材提取物的推广使用。
本实验以红车轴草药材及提取物为研究对象，主要做了以下几个方面的工作：
1.红车轴草药材及提取物的含量测定建立HPLC含量测定方法，测定了浏阳生产基地红车轴草药材在不同采收时间的芒柄花素和鹰嘴豆芽素A的含量；比较了药材在鲜活状态、烘干、晒干、阴干状态的芒柄花素和鹰嘴豆芽素A 的含量差异；
并对其提取物进行稳定性试验。
2.红车轴草鲜、干药材HPLC指纹图谱建立建立了红车轴草鲜、干药材提取物的HPLC 指纹图谱，采用相似度作为指纹图谱评价参数，计算不同产地、不同采收期的红车轴草药材提取物的HPLC指纹图谱之间以及与对照指纹图谱之间的相似度。比较了鲜药材和干药材提取物的指纹图谱的特征，重点研究的红车轴草鲜药材提取物的特征，建立其质量控制标准。
3.红车轴草提取物精制工艺研究初步探讨了用氧化铝柱层析分离红车轴草中有效成分芒柄花素和鹰嘴豆芽素A的纯化工艺。
通过以上工作，本实验课题取得了以下进展：
1.比较不同采收期的红车轴草药材中有效成分的含量，结合其亩产量，确定了红车轴草药材的最佳采收期。证明药材在干燥的过程中有效成分有所损失，提取物能长期保持其稳定性，为从新鲜的药材直接生产提取物提供理论依据。
2.分别建立了并以红车轴草鲜药材为原料的提取物和红车轴草干燥后生产的提取物的HPLC指纹图谱，总结了不同生产工艺的红车轴草提取物产品的特征
3.初步建立了氧化铝柱层析新工艺，进一步试验可确定其最佳工艺参数，能有效的使鹰嘴豆芽素A 和芒柄花素达到分离。