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当前,罗非鱼养殖面临的主要问题是其对病原体感染的敏感性如无乳链球菌,以及环境胁迫因素,如缺氧、冷和热应激等。目前研究表明,天然免疫刺激剂的使用对鱼类具有增强其免疫力和提高其生存环境耐受性的潜力。本研究对中草药（TCM,黄芪、当归和山楂混合比例为1:1:1 w/w）、芽孢杆菌组合（BS,枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌混合比例为1:1 w/w）及中草药-芽孢杆菌联合（TCMBS）的功效进行探索,获得TCM、BS及TCMBS最佳添加剂量,并将其作为罗非鱼养殖中潜在的免疫增强剂以确定它们对改善罗非鱼生长和免疫的作用,其研究结果为更好地了解中草药和芽孢杆菌在改善罗非鱼生长和免疫方面的作用机制奠定基础。该研究用BS、TCM和TCMBS分别投喂罗非鱼,测定其生长指标和免疫指标,其投喂配方如下:在单种投喂组（TCM或BS）实验中,鱼投喂含有10 g kg-1 TCM的饲料或3 g kg-1（BS3）、5 g kg-1（BS5）、7 g kg-1（BS7）和10 g kg-1（BS10）的饲料;在TCMBS混合组中,鱼投喂含有TCMBS1(TCM 3g kg-1和BS 7g kg-1)、TCMBS2(TCM 5 g kg-1和BS 5 g kg-1)、TCMBS3(TCM 7 g kg-1和BS 3 g kg-1)的饲料;对照组投喂不添加TCM和BS的基础饲料。主要结果如下:TCM、BS和TCMBS对罗非鱼生长和免疫应答的影响投喂4周后,生长指数即体重增加（WG）、生长速率（SGR）和饲料转化率（FCR）的分析表明,单独使用TCM和BS10的实验组与CT组相比,WG和SGR显著增加（P<0.05）,但是FCR有所降低。混合组中,TCMBS3组与CT组相比,各项生长指数显著增加（P<0.05）。在所有实验组中,TCMBS3组与CT组相比生长指数增加最多（P>0.05）。投喂4周后,TCM组和BS组对体液免疫应答结果显示,血清溶菌酶（LYZ）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、蛋白酶和抗蛋白酶活性以及免疫球蛋白IgM水平与CT组相比均显著增强（P<0.05）。在所有TCMBS混合组中也是类似结果:LYZ、SOD、CAT、蛋白酶和抗蛋白酶活性均显著增强（P<0.05）,但TCMBS3组CAT和抗蛋白酶活性增强最多。此外,用不同配比的TCMBS混合组合喂养4周后,尼罗罗非鱼皮肤粘液的总蛋白浓度、LYZ、蛋白酶、抗蛋白酶和过氧化物酶活性对比CT组均显著增加（P<0.05）,但在所有实验组中均未观察到pH和碱性磷酸酶（ALP）活性的显著变化（P>0.05）,其中TCMBS3组在皮肤粘液中测量的所有指数中显示出最佳效果（P<0.05）。此外,与CT相比,TCMBS3组皮肤粘液对无乳链球菌和嗜水气单胞菌生长具有显著的杀菌活性（P<0.05）。在罗非鱼免疫相关基因的表达试验中,TCM组、BS组以及TCMBS组与CT组相比,中肠（MINT）和头肾（HK）中的热休克蛋白HSP70和C-溶菌酶C-LYZ显著上调（P<0.05）。在所有TCMBS组中,TCMBS3组的免疫相关基因表达量最高（P<0.05）,且皮肤组织中白细胞介素1β（IL-1β）、白细胞介素10（IL-10）、主要组织相容性复合物1（MHC1）、干扰素γ（INF-γ）、Caspase-3和免疫球蛋白IgD基因的表达量显著上调（P<0.05）。用无乳链球菌攻毒上述养殖的罗非鱼后,各组的存活率如下:TCMBS3组（97%）,BS10组（80%）,TCM组（70%）和CT组（35%）。上述结果表明,使用TCM、BS或TCMBS3投喂后,TCMBS3对尼罗罗非鱼具有更高的免疫增强作用。为进一步研究TCMBS3对尼罗罗非鱼免疫系统的影响,本实验对试验鱼的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）氧化酶基因和抗氧化基因的表达量及中性粒细胞中的活性氧（ROS）含量进行了测定。结果显示TCMBS3组罗非鱼的NADPH氧化酶基因(即gp91phox,p22phox,p40phox,p47phox和p67phox)和抗氧化基因（即SOD、CAT和GST）的表达量显著上调,且罗非鱼脾组织中性粒细胞的ROS含量增加。综上所述,在饲料中使用TCM、BS或TCMBS混合物作为添加剂可显著增强罗非鱼的免疫力,且TCMBS3组合具有最佳改善罗非鱼生长和增强免疫力的效果。投喂TCM和BS对尼罗罗非鱼环境胁迫的影响为研究投喂TCM或BS后尼罗罗非鱼对不良环境的反应,本实验设计TCM、BS、TCMBS1、TCMBS2、TCMBS3以及CT组进行8周投喂,然后对实验鱼进行缺氧、冷和热应激处理,评价相关血液免疫学指标、应激和抗氧化指数、压力相关基因表达。实验结果表明,大多数实验组中的血细胞比容、红细胞、血红蛋白和白细胞与CT组相比均有显著增加（P<0.05）;而皮质醇、葡萄糖、丙酮酸激酶、丙氨酸氨基转移酶,天冬氨酸氨基转移酶和乳酸脱氢酶均有显著降低（P<0.05）;而血清中的髓过氧化物酶、总抗氧化能力、超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活性也显著增加（P<0.05）。此外,所有TCMBS组罗非鱼肝脏中的HSP70和缺氧诱导因子1α（HIF-1α）mRNA的表达量均显著增加（P<0.05）。在所有实验组中,应用TCMBS2饲料投喂罗非鱼8周后各参数与其他组相比有显著差异,表明其抵抗不良环境效果最好。