恩度联合TP方案对人MCF-7乳腺癌裸鼠移植瘤VEGF、MMP-2表达的影响

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目的通过免疫荧光双重染色和蛋白质印迹法检测恩度治疗、新辅助化疗以及二者联合治疗后人MCF-7乳腺癌裸鼠移植瘤中VEGF和MMP-2的表达,评价恩度对人MCF-7乳腺癌裸鼠移植瘤的抗血管生成和肿瘤侵袭转移的作用、恩度与新辅助化疗的协同作用。方法1、从液氮中取出冻存的人MCF-7乳腺癌细胞株,37℃水浴锅中溶解后置于含小牛血清的DMEM完全培养基中培养,细胞贴壁生长,2~3d传代1次,将对数生长期MCF-7细胞,吹打成细胞悬液,浓度为1×107/0.2ml,于裸鼠右侧乳垫下注射0.2ml,之后将成瘤的24只裸鼠随机分成对照组、新辅助化疗组、恩度组和联合治疗组(新辅助化疗+恩度),每组6只,各组治疗前、治疗中及治疗2周后分别测得各组的肿瘤生长曲线和抑瘤率。2、各组裸鼠治疗2周后颈椎脱位法处死,留取移植瘤标本,其中部分移植瘤组织用酒精脱水,二甲苯和石蜡包埋固定,5μm连续切片备用,其余部分移植瘤组织液氮速冻后-80℃保存备用。采用免疫荧光双重染色和Western blot检测移植瘤VEGF、MMP-2的表达,将免疫荧光双重染色与Western blot检测结果进行统计学分析。结果1、治疗后恩度组、联合治疗组较对照组人MCF-7乳腺癌裸鼠移植瘤肿瘤体积明显减小(p<0.01),肿瘤生长曲线平缓上升。新辅助化疗组与对照组肿瘤体积差异不具有显著统计学意义(p>0.05),肿瘤生长曲线呈上升趋势。2、免疫荧光双重染色检测结果表明:新辅助化疗组、恩度组、联合治疗组人MCF-7乳腺癌裸鼠移植瘤VEGF、MMP-2表达较对照组明显减低,差异有显著统计学意义(p<0.01),新辅助化疗组与恩度组人MCF-7乳腺癌裸鼠移植瘤VEGF表达差异不具有显著统计学意义(p>0.05)。3、Western blot检测结果表明:新辅助化疗组、恩度组、联合治疗组人MCF-7乳腺癌裸鼠移植瘤VEGF、MMP-2表达较对照组明显减低,差异有显著统计学意义(p<0.05)。4、联合治疗组较新辅助化疗组、恩度组人MCF-7乳腺癌裸鼠移植瘤VEGF、MMP-2表达明显降低,免疫荧光双重染色和Western blot检测结果均显示恩度和新辅助化疗对VEGF表达的抑制具有协同作用(p<0.05),免疫荧光双重染色检测结果显示恩度和新辅助化疗对MMP-2表达的抑制具有协同作用(p<0.05)。结论1、恩度作为一种靶向抑制肿瘤血管生成和侵袭转移的治疗药物,作用于乳腺癌组织后可使乳腺癌组织中VEGF、MMP-2的表达程度降低。新辅助化疗药物也有一定的抗血管生成和抑制侵袭转移作用。2、恩度与新辅助化疗联合治疗对乳腺癌组织中VEGF、MMP-2表达的抑制产生了协同作用,能一定程度地提高恩度的治疗疗效,瘤组织中VEGF、MMP-2的表达程度显著降低,进而明确肿瘤内血管生成及肿瘤侵袭转移情况,为指导人乳腺癌的治疗疗效的评价提供了理论依据。
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