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目的:1997年,Ji等利用直接差异cDNA序列分析(direct differential cDNA sequencing)克隆出一种新的人类基因,并发现其在浸润性乳腺癌高度表达,而在正常乳腺或良性乳腺病变中几乎不表达,遂命名为乳腺癌特异基因(breast cancer specific gene l,BCSG1)。最近国外文献报导,BCSG1蛋白在很多肿瘤组织中都有异常表达,其中包括肝癌、食管癌、大肠癌、胃癌、肺癌、前列腺癌、宫颈癌等,而且发现其表达有一定的阶段特异性,表现为Ⅰ期肿瘤几乎不表达,而在Ⅱ-Ⅳ期肿瘤组织中高表达,进一步证明BCSG1蛋白表达与肿瘤远处转移有密切相关性。食管癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一,在各种癌症死亡率中居第二位,在河北省尤为高发。本实验采用反义寡核苷酸技术,根据Watson-Crick和Hoogsteen的碱基互补配对原则,制备与靶基因BCSG1 mRNA特异互补的DNA片段,即BCSG1反义寡核苷酸(antisense oligodeoxunudeotide, ASODN)。ASODN在脂质体介导下转染食管低分化鳞癌细胞TE-13,通过与单链mRNA或双链DNA结合形成部分双链分子或三链核酸,激活核酸酶H(RNase H)将其裂解或抑制mRNA成熟、胞浆转运及翻译过程,从而阻断靶基因蛋白的合成。然后通过观察TE-13细胞增殖、凋亡及侵袭的改变,进一步探索BCSG1在该细胞生物学行为方面的功能。另外,探讨食管鳞癌基因治疗新的靶基因的可能性。方法:将体外培养的TE-13细胞分成三组(ASODN组、空脂质体组、空白对照组)。三组细胞都按照转染的过程处理,其中ASODN组同时加入脂质体(终浓度为10μl/ml)和BCSG1反义寡核苷酸(终浓度为0.4μmol/L),空脂质体组中只加入脂质体(终浓度为10μl/ml),空白对照组的细胞加入无牛清及抗生素的RPMI-1640培基代替转染复合物。1观察转染BCSG1 ASODN对细胞内BCSG1的mRNA表达水平和其蛋白的封闭情况。转染48h后,通过逆转录-聚合酶链反应(revers transcription PCR, RT-PCR)半定量检测各组细胞内BCSG1 mRNA表达水平。同时采用流式细胞术(flow cytometry, FCM)半定量检测各组细胞内BCSG1蛋白含量。2应用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测BCSG1反义寡核苷酸对细胞增殖的抑制作用。3采用流式细胞术(FCM)检测各组细胞凋亡情况。4利用Transwell体外侵袭实验检测转染BCSG1反义寡核苷酸对TE-13细胞侵袭力的影响。结果:1半定量RT-PCR结果显示:空脂质体组及空白对照组mRNA表达相对值分别为0.539、0.566, ASODN组mRNA表达量明显降低为0.437,与空脂质体及空白对照组相比均有统计学意义(p<0.05)。空脂质体组及空白对照组BCSG1 mRNA表达差异无统计学意义(p>0.05)。2流式细胞术检测结果显示:BCSG1在ASODN组、空脂质体组和空白对照组细胞中蛋白荧光指数(FI)分别为0.703、0.960、1.000,以ASODN组细胞蛋白表达量最低,与后两组比较差异均有显著性(p<0.05),后两组之间BCSG1蛋白表达无统计学意义(p>0.05)。3 MTT结果显示:BCSG1反义寡核苷酸对TE-13细胞增殖有明显的抑制作用。0.4μmol/L BCSG1反义寡核苷酸转染细胞48h后细胞OD值为0.380,与空脂质体组(0.674)和空白组(0.717)比较有显著性差异(p<0.05)。后两组比较差异无统计学意义(p>0.05)。4流式细胞术检测细胞凋亡率分别为:ASODN组26.68%,空脂质体组3.31%,空白对照组2.60%。ASODN组与空脂质体组、空白对照组比较有显著性差异(p<0.05),而后两组比较无显著性差异(p>0.05)。5 Transwell体外侵袭实验的结果:相对于空脂质体组和空白对照组,ASODN组侵袭至下室面的TE-13细胞数量显著下降(p<0.05),而空脂质体组和空白对照组之间比较无统计学意义(p>0.05)。结论:1 BCSG1在人食管低分化鳞癌TE-13细胞株中表达较高。本研究设计的BCSG1反义寡核苷酸能够在mRNA转录水平和蛋白翻译水平抑制TE-13细胞中BCSG1表达。2 MTT试验显示BCSG1反义寡核苷酸可以明显抑制TE-13细胞增殖。3流式细胞术结果表明BCSG1反义寡核苷酸可以诱导TE-13细胞的凋亡。4 Transwell体外侵袭试验表明BCSG1反义寡核苷酸能明显降低TE-13细胞的侵袭性。5进一步说明BCSG1与TE-13细胞生物学特性有密切关系,在细胞增殖、凋亡、侵袭过程中起重要作用。