人内源性逆转录病毒(human endogenous retroviruses,HERV)是生物进化过程中远古逆转录病毒感染人类基因组,继而通过孟德尔遗传方式被后代遗传留下的遗迹。HERV至少可分为31个家族,而研究最多的是HERV-K、ERV-H、 HERV-W三个家族。其中Syncytin是HERV-W基因编码的囊膜蛋白,由538个氨基酸组成。本研究小组在研究中发现在8个白血病或淋巴瘤细胞系中syncytin mRNA和syncytin蛋白均有不同程度的表达,并且syncytin基因的表达水平与白血病患者病情相关。通过用密度梯度离心法分离患者及正常对照的外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),利用自制的抗体检测白血病患者细胞膜上的表达。证实了syncytin蛋白在白血病细胞系以及部分患者外周血细胞膜有表达。白血病对人类的生命和健康造成了极大的威胁,是国内10个高发的一类造血干细胞克隆性的恶性肿瘤,其男性的发病率高于女性,且35岁以下人群发病率的死亡率最高。从白血病的发现至今,我们还没用完全清楚白血病复杂的病因与发病机制。白血病的发病主要与遗传因素,病毒因素,染色体及免疫功能遗传有关。20世纪70年代以来白血病实验研究的新发展是利用免疫缺陷动物做白血病动物模型,从而研究人类白血病细胞的发生、发展、分子机制及其生物学特性,进而用来进行实验治疗,寻求诊断白血病新的靶点。小鼠造血系统特点与人类十分相似,同时近交系动物基因纯合度高,遗传背景均一,易于控制,重复性好。因此,选择近交系小鼠构建syncytin基因异常表达小鼠白血病动物模型更能近似反映人体的实际情况。能够为研究syncytin基因在白血病发生机制中所起的作用和解析syncytin基因如何参与白血病分子机理以及靶向基因治疗的研究提供一个较为理想的模型。本实验采用lipofectamine 2000 Reagent将syncytin过表达载体转染到EL4细胞和293T细胞,转染48 h后荧光倒置显微镜下观察,只在293T细胞空载体发现荧光,经Western Blot和RT-PCR检测,过表达组Syncytin蛋白和基因相对表达量明显高于对照组,表明过表达载体有效可用。利用Lenti-Pac HIV慢病毒包装Syncytin表达质粒,感染EL4细胞,用含有嘌呤霉素的培养基进行阳性筛选,获得稳定表达syncytin的细胞株。经Western Blot检测,过表达syncytin细胞组的syncytin/β-Actin灰度比值明显高于对照组；QPCR检测稳定表达细胞mRNA表达结果显示只有过表达syncytin细胞有相对高的表达量。上述实验揭示了稳定表达Syncytin蛋白的syncytin-EL4细胞系构建成功。本实验同时用低表达syncytin的Jurkat细胞系做小鼠白血病动物模型预实验。选用C57BL/6小鼠,供鼠为雄鼠,受鼠为雌鼠。骨髓移植前6天给与含硫酸庆大霉素(0.004ml/只)无菌水喂养,持续至移植后2周。前7天进行消洗宝液(0.1g/L)药浴,前三天开始所有小鼠每天一次分别经尾静脉注射环磷酰胺(CTX),注射量为100mg/kg。前2天将(1-2)×106各组细胞0.5m1经尾静脉接种至C57BL/6小鼠。骨髓移植后观察发现各组小鼠的体重情况变化均幅度不大,小鼠多运动,精神状态较好。两周后小鼠尾尖取血涂片观察,对照组(EL4细胞组)和实验组(syncytin低表达细胞组)中的原始细胞的比例没有显著性的差异(P>0.05)综上所述,本实验成功建立了稳定表达Syncytin蛋白的syncytin-EL4细胞系,为下一步建立稳定表达syncytin-EL4细胞系小鼠白血病动物模型和分析研究syncytin与白血病免疫逃逸机制提供了细胞模型。小鼠白血病动物模型的预实验间接证实了低表达syncytin的Jurkat细胞系可能在培养过程中出现syncytin基因不表达或缺失,猜想syncytin在低表达syncytin田胞中的表达在细胞多次传代后受到其他基因的抑制。该动物模型的建立为后续的syncytin-EL4稳定表达细胞系小鼠白血病动物模型的建立提供了更明确的实验方法,从而为揭示syncytin在小鼠白血病发生的机制研究奠定基础的一步。