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第一部分炎症因子在溃疡性结肠炎癌变中的作用机制初探目的:比较氧化偶氮甲烷(AOM)联合葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的溃疡性结肠炎(UC)癌变动物模型的不同建立方法,并在此动物模型中探讨炎症因子NF-κB、TNF-α在UC癌变中的作用机制。方法与分组:首先,比较UC癌变小鼠模型的建立方法,将C57BL/6小鼠随机分为4组,第1组为AOM+3轮DSS组:AOM 12.5mg/kg腹腔注射,1周后给予第一轮2.5%DSS的饮用水,连续5天,之后换成普通饮用水,每隔3周重复给予一次DSS,共给3轮;第2组为AOM+1轮DSS组:同第一组给予AOM腹腔注射后,仅给予第一轮DSS饮用;第3组为生理盐水+3轮DSS组:生理盐水腹腔注射后,同第1组给予3轮DSS饮用;第4组为空白对照组。以上4组均12周后处死小鼠,统计瘤负荷(TL)和死亡率,进行病理学评估。然后,在AOM/DSS小鼠模型中探讨NF-κB、TNF-α在UC癌变中的作用机制,C57BL/6小鼠随机分为6组,1-5组采用上述方法建立AOM/DSS诱导的UC癌变小鼠模型,第1组给予NF-κB反义寡聚核苷酸每两周一次灌肠;第2组给予TNF-α单克隆抗体每两周一次腹腔注射;第3组给予等量生理盐水灌肠;第4组给予等量生理盐水腹腔注射;第5组为模型对照组,仅建立AOM/DSS小鼠模型,不予干预;第6组为空白对照组。12周后处死小鼠,统计瘤负荷,进行病理学评估,采用ELISA方法检测结肠组织TNF-α、IL-6水平,EMSA检测NF-κB活化程度,免疫组化检测β-catenin细胞核内分布,EMSA检测TCF-4转录活性。结果:不同小鼠建模比较发现,AOM+3轮DSS组(n=11)和AOM+1轮DSS组(n=14)的成瘤率均为100%,但AOM+1轮DSS组小鼠的死亡率低,因此采用AOM+1轮DSS作为UC癌变小鼠模型的建立方法。NF-κB反义寡聚核苷酸组(n=8)的瘤负荷(0.92±0.17cm)较灌肠模型对照组(n=12,TL=2.07±0.33cm)显著下降,差异有统计学意义(p＜0.05);EMSA证实NF-κB反义寡聚核苷酸灌肠后可抑制NF-κB的活化;NF-κB反义寡聚核苷酸组的炎症因子TNF-α和IL-6水平显著低于模型对照组(p<0.05);TNF-α单克隆抗体组(n=9)的瘤负荷(1.45±0.27cm)较腹腔注射模型对照组(n=12,TL=2.20±0.34cm)有下降趋势,但差异无统计学意义(p>0.05);ELISA证实TNF-α单克隆抗体组的结肠组织TNF-α水平较模型对照组显著下降(p＜0.05),且IL-6水平显著下降(p<0.05);TNF-α单克隆抗体组的NF-κB活化程度下降;NF-κB反义寡聚核苷酸组和TNF-α单克隆抗体组的小鼠结肠上皮细胞核中的β-catenin水平均显著下降(p<0.05),TCF-4的转录活性下降,Wnt途径下调。结论:AOM腹腔注射后1轮DSS处理是建立UC癌变小鼠模型的较好方法;炎症因子TNF-α、IL-6在AOM/DSS诱导的UC癌变的小鼠模型中发挥着重要作用,NF-κB反义寡聚核昔酸和TNF-α单克隆抗体通过抑制NF-κB活性,下调Wnt/β-catenin途径,抑制UC癌变的发生。第二部分益生菌对溃疡性结肠炎癌变的抑制作用及相关机制初探目的:探索益生菌及5-氨基水杨酸(5-ASA)对AOM/DSS诱导的UC癌变小鼠模型的干预作用及相关机制。方法与分组:C57BL/6小鼠随机分为7组,第1-6组建立AOM/DSS诱导的UC癌变小鼠模型,腹腔注射AOM12.5mg/kg,1周后给予含2.5%DSS的饮用水,连续5天,之后换成普通饮用水,12周后建模完成。第1组为5-ASA组,给予5-ASA 75mg/kg/d每日灌胃;第2组为布拉氏酵母菌组,给予布拉氏酵母菌5×l07CFU/d每日灌胃;第3组为VSL#3组,给予VSL#3 1.5×109CFU/d每日灌胃;第4组为5-ASA+布拉氏酵母菌组,给予上述剂量5-ASA +布拉氏酵母菌每日灌胃;第5组为5-ASA+ VSL#3组,给予上述剂量5-ASA+VSL#3每日灌胃;第6组为模型对照组,仅建立AOM/DSS小鼠模型,不予干预;第7组为空白对照组。12周后处死小鼠,统计瘤负荷(TL),进行病理学评估,采用ELISA方法检测结肠组织TNF-α、IL-6、IL-10水平,EMSA检测NF-κB活化程度,免疫组化检测β-catenin细胞核内分布,EMSA检测TCF-4转录活性。结果:(1)各组的瘤负荷显示:5-ASA组(n=20,TL=0.43±0.14cm)、布拉氏酵母菌组(n=19,TL=0.20±0.07cm)、VSL#3 组(n=20,TL=0.25±0.07cm)、5-ASA+布拉氏酵母菌组(n=20,TL=0.53±0.11cm)、5ASA+VSL#3 组(n=19,TL=0.46±0.11cm)较模型对照组(n=19,TL=0.97±0.19cm)均显著下降,差异有统计学意义(p＜0.05)。(2)小鼠结肠组织炎症因子水平测定发现:5-ASA组、布拉氏酵母菌组、VSL#3组、5-ASA+布拉氏酵母菌组、5ASA+VSL#3组的TNF-α和IL-6水平均较模型对照组明显下降,IL-10水平较模型对照组明显上升,差异有统计学意义(p＜0.05)。(3)EMSA检测NF-κB转录活性显示:5-ASA组、布拉氏酵母菌组、VSL#3组、5-ASA+布拉氏酵母菌组、5ASA+VSL#3组的NF-κB转录活性均较模型对照组下降。(4)小鼠结肠组织β-catenin免疫组化显示:5-ASA组、布拉氏酵母菌组、VSL#3组、5-ASA+布拉氏酵母菌组、5-ASA+VSL#3组结肠上皮细胞中β-catenin的细胞核表达量较模型对照组明显减少,差异有统计学意义(p<0.05)。(5)EMSA检测TCF-4转录活性显示:5-ASA组、布拉氏酵母菌组、VSL#3组、5-ASA+布拉氏酵母菌组、5ASA+VSL#3组的TCF-4转录活性均较模型对照组下降。结论:益生菌和5-ASA可以抑制AOM/DSS诱导的UC癌变小鼠的结肠成瘤,机制可能通过下调促炎因子TNF-α、IL-6水平,上调抑炎因子IL-10 水平,进而抑制NF-κB转录活性,最终减少β-catenin的入核、抑制TCF-4转录活性,下调Wnt/β-catenin途径,从而抑制了炎癌转化。目的:评价亚太地区结肠癌筛查评分(APCS评分)在中国大陆无症状人群中的应用价值,并探究进展期结直肠新生物(ACN,包括进展期结直肠腺瘤和结直肠癌)发生的高危因素。方法:本研究纳入2012至2014年间北京地区40-75岁的行结肠镜检查的无症状体检人群。所有受试者均接受高危因素问卷,并计算APCS评分,根据APCS评分将受试者分为高危组、中危组、低危组。采用SPSS17.0统计软件对数据进行统计学分析。应用卡方检验评价高危组、中危组、低危组中ACN检出率的差异。应用logistic二元回归,分析BMI、糖尿病、饮酒、长期应用NSAIDS各项因素对ACN的影响。结果:纳入人群共1010名,平均年龄53.54岁(SD 8.35),男性比例55.05%。所有筛查人群中,结肠镜证实的ACN占4.06%。APCS评分高危组、中危组、低危组的ACN检出率分别为8.8%,2.83%,1.55%(p=0.000),其中进展期腺瘤检出率分别为 7.2%,2.65%,1.54%(p=0.001);结肠癌检出率分别为 1.6%,0.17%,0(p=0.015)。高危组的ACN检出率比中危组提高了 3.3倍(95%CI 1.7-6.4,p=0.000),比低危组提高了 6.1倍(95%CI 1.8-20.8,p=0.001)。Logistic单因素回归分析显示,肥胖(BMI≥25,OR=2.474,95%CI:1.081-5.659,p=0.032),糖尿病(OR=2.385,95%CI:1.023-5.559,p=0.044),饮酒(OR=1.974,95%CI:1.033-3.774,p=0.040),APCS 评分高危(APCS 得分≥4,OR=3.763,95%CI:2.001-7.077,p=0.000)和ACN相关。Logistic多因素回归分析显示,仅APCS评分高危(调整OR值3.395,95%CI,1.756-6.565,p = 0.000)是 ACN 的独立危险因素。结论:在中国无症状人群中,APCS评分系统可以有效筛选出高危人群,对于预测ACN具有良好的应用价值。肥胖、糖尿病、饮酒为ACN的危险因素,可加入APCS评分系统中,对亚太地区结直肠癌筛查方案进行优化。