血栓性疾病对人类生活的影响越来越大,严重危害着人类的健康,开发新型有效的溶栓试剂迫在眉睫。而纤溶酶是溶栓药物的主要来源。关于溶栓药物的开发已经历了四代,各有其优缺点。海洋源纤溶酶的来源非常广,包括动物、植物、微生物均可见报道。本实验室前期从海洋星虫-可口革囊星虫肠道中提取得到一种具有纤溶活性较强的酶,并且测得其N端的氨基酸序列,结合5’RACE和3’RACE技术得到了两条纤溶酶序列,分别命名为PFE-1和PFE-2。本课题就是对PFE-2进行外源的表达。成功构建了原核表达载体pET-22b(+)-PFE-2,乳糖诱导表达,但是重组蛋白无活性;随后又构建了带组氨酸标签的表达载体pET-22b(+)-PFE-2(his)和分子伴侣共表达,虽然相较于之前,重组蛋白的可溶性表达提高了,但是依旧无活性。成功构建构建了真核表达载体pPic9-PFE-2和pPic9-PFE-2(his),随即电转于毕赤酵母GS115之后,筛选出了两株工程菌pPic9-PFE-2-GS115和pPic9-PFE-2(his)-GS115,甲醇诱导表达,纤维平板实验结果出现了透明圈,说明重组蛋白纤溶活性良好。所以采用真核表达系统要优于原核表达系统。研究结果说明采用真核表达系统可以表达出有纤溶活性的重组纤溶酶,活性良好,这也拓宽了海洋源的纤溶酶库,并且也寻找出了一条采用外源表达系统表达PFE-2的途径,从而为新型溶栓药物的研发提供了新的渠道。