第一部分 miR-1250及其宿主基因AATK在食管鳞状细胞癌中的作用及其甲基化状态　　目的：研究miR-1250和细胞凋亡关联酪氨酸激酶（apoptosis-associated tyrosine kinase，AATK）在食管癌细胞系及食管鳞状细胞癌（Esophageal squamous cell carcinoma，ESCC）组织中的表达情况及甲基化状态，并分析其表达和甲基化状态与患者临床病理特征之间的关系。探讨miR-1250及其宿主基因AATK在ESCC发生、发展中的作用。　　方法：　　1 应用实时荧光定量反转录多聚核苷酸酶链式反应（Quantitative real-time RT-PCR，qRT-PCR）的方法分别检测miR-1250和AATK的mRNA在DNA甲基化转移酶抑制剂5-Aza-dC处理前后的食管癌细胞系以及ESCC组织及其相应癌旁正常组织中的表达情况。　　2 应用免疫印迹试验（Western Blot，WB）检测在5-Aza-dC处理前后的食管癌细胞系中AATK蛋白的表达情况。　　3 应用免疫组织化学（immunohistochemistry，IHC）SP法检测ESCC组织及其相应癌旁正常组织中AATK蛋白的表达情况。　　4 应用甲基化特异性聚合酶链反应(Methylation specific polymerase chain reaction，MSP)的方法分别检测AATK在5-Aza-dC处理前后的食管癌细胞系以及ESCC组织及其相应癌旁正常组织中的甲基化状态。　　结果：　　1. miR-1250和AATK在食管癌细胞系中的表达情况及甲基化状态：miR-1250和AATK在5-Aza-dC处理后的4株食管癌细胞系（Eca109、TE1、Yes-2、T.TN）中的表达均显著上调；AATK在5-Aza-dC处理后的4株食管癌细胞系中甲基化程度均明显降低（P＜0.05）。　　2. miR-1250和AATK的mRNA在ESCC组织中的表达情况：miR-1250和AATK在ESCC组织中的相对表达量显著低于其相应癌旁正常组织（P＜0.05），并且与淋巴结转移、分化程度和TNM分期相关（P均＜0.05），与性别、年龄无关（P均>0.05）。　　3. AATK蛋白在ESCC组织及其相应癌旁正常组织中的表达情况：AATK蛋白在ESCC组织中的表达阳性率显著低于其相应癌旁正常组织（P＜0.05），并且与分化程度和TNM分期相关（P均＜0.05），与淋巴结转移、性别和年龄无关（P均＞0.05）。　　4. AATK在ESCC组织及其相应癌旁正常组织中的甲基化状态：AATK 在 ESCC 组织中的甲基化率显著高于其相应癌旁正常组织（P＜0.05），并且与淋巴结转移、分化程度和TNM分期相关（P均＜0.05），与性别、年龄无关（P均＞0.05）。　　5. miR-1250、AATK的表达与甲基化间的相关性分析：　　1）在ESCC组织中miR-1250和AATK的mRNA表达之间呈明显正相关（P＜0.05）。　　2）AATK的mRNA表达在其蛋白表达阳性的ESCC组织中显著高于其蛋白表达阴性的ESCC组织（P＜0.05）。　　3）miR-1250在发生甲基化的ESCC组织中的表达明显低于未发生甲基化的ESCC组织（P＜0.05）。　　4）AATK在发生甲基化的ESCC组织中的mRNA表达显著低于未发生甲基化的ESCC组织（P＜0.05）。　　5）AATK蛋白在发生甲基化的ESC组织中的表达显著低于未发生甲基化的ESCC组织（P＜0.05）。　　第二部分 miR-1250在食管癌细胞中的生物学功能　　目的：研究过表达miR-1250后，食管癌细胞体外增殖、迁移和侵袭能力的改变。　　方法：　　1 在Eca109细胞中转染miR-1250的mimics，并通过qRT-PCR的方法检测转染效率。　　2 应用MTS、克隆形成实验检测过表达miR-1250后对食管癌细胞增殖能力的影响。　　3 应用划痕实验检测过表达miR-1250后对食管癌细胞迁移能力的影响。　　4 应用Transwell小室侵袭实验检测过表达miR-1250后对食管癌细胞侵袭能力的影响。　　结果：　　1. 在Eca109细胞中过表达miR-1250后的转染情况：在Eca109细胞中成功过表达miR-1250，miR-1250在转染组细胞中表达均显著高于对照组的Eca109细胞（P＜0.05）。　　2. 过表达miR-1250后对食管癌细胞增殖能力的影响：MTS和克隆形成实验结果显示，过表达miR-1250能够显著抑制Eca109细胞的增殖活性（P＜0.05）。　　3. 过表达miR-1250后对食管癌细胞迁移能力的影响：划痕实验结果显示，过表达miR-1250能够显著抑制Eca109细胞的迁移能力（P＜0.05）。　　4. 过表达miR-1250后对食管癌细胞侵袭能力的影响：Transwell小室侵袭实验结果显示，过表达miR-1250能够显著抑制Eca109细胞的侵袭能力（P＜0.05）。　　结论：　　1. 食管鳞癌中miR-1250与其宿主基因AATK的表达具有一致性，且它们的表达降低与食管鳞癌患者的分化程度和TNM分期密切相关，提示AATK可能是miR-1250的宿主基因，并且两者在食管鳞癌中可能作为抑癌基因，且它们的失活与食管鳞癌的侵袭转移有关。　　2. 启动子区异常高甲基化可能是miR-1250及AATK在食管鳞癌中表达沉默的重要机制之一。　　3. 过表达miR-1250后食管癌细胞体外增殖、迁移和侵袭能力受到抑制，进一步提示miR-1250与食管鳞癌的侵袭转移相关。